FACŢORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

FACŢORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Los biocatalizadores específicos sintetizados por el organismo, llamados enzimas son proteínas que intervienen en las reacciones biológicas, acelerando la velocidad de reacción hasta alcanzar su punto de equilibrio. Las enzimas son sumamente especìficas en las reacciones que catalizan y en los compuestos (llamados sustratos) sobre los que actúan.

La cinética enzimàtica es el estudio del comportamiento de la velocidad en reacciones catalizadas por enzimas. Las mediciones de la cinética proporcionan una herramienta bioquímica muy útil para calcular la concentración de una enzima en una muestra biológica y comparar su actividad catalítica con la de otras enzimas. Además, las mediciones cinéticas permiten describir de manera cuantitativa los tipos de inhibición enzimática y el efecto de un veneno o medicamento sobre la actividad de una enzima.

La velocidad a la que procede una reacción enzimàtica está controlada en parte por las concentraciones de la enzima y el sustrato. A medida que progresa la reacción, aumenta la concentración de los productos a expensas de la desaparición de los correspondientes sustratos, en tanto que la concentración de la enzima no se altere.

La actividad enzimàtica puede expresarse:

a) Por la desaparición del sustrato (S).

b) Por la aparición de productos (P).

c) Por modificación de cofactores (C).

El mecanismo de reacción enzima-sustrato puede simbolizarse asì:

[E] + [S] [E] + [P]

C C'

Diversos factores modifican la actividad enzimàtica, tales como:

1) Concentración de sustrato [S]

2) Concentración de la enzima [E]

3) pH del medio

4) Influencia de la temperatura

5) Efecto de inhibidores y activadores

En la presente práctica estudiaremos el efecto de estos factores sobre la actividad enzimàtica de la amilasa salival sobre el almidón.

La amilasa es una enzima que degrada moléculas hidrocarbonadas complejas en componentes mas pequeños, tiene un PM de 40,000 a 50,000 daltons. Es producida por el páncreas exocrino y las glándulas salivales para ayudar a digerir el almidón. La amilasa humana se denomina “alfa-amilasa” por su capacidad para romper los enlaces polisacáridos alfa-1,4 al azar. Los enlaces alfa-1,6 de los puntos de ramificación no se alteran. El producto final de la acción de la alfa-amilasa sobre el almidón es la formación de dextrinas, maltosas y algunas moléculas de glucosa. El pH óptimo al cual actúa es 6.9 a 7 y se requiere cloro para su activación.

En la práctica la actividad enzimàtica se medirá por la desaparición del sustrato (disminución de la turbidez en los tubos que contienen almidón), la cual se determinará en el espectrofotómetro a 650 nm.

EXPERIMENTO A

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA, DE LA TEMPERATURA Y DEL ION CLORO SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL

1) Preparar los siguientes tubos:

Tubos No. I II III IV V VI

Solución

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