Medios De Cultivos

Enbiología, y específicamente enmicrobiología,un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos como bacterias, hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades

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.Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en transferir una muestra microbiológica de una ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos. Al efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el área de trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también las condiciones ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH y concentración de sales y durante la incubación condiciones tales como la temperatura, aireación la luminosidad.

La aplicación de estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención de cultivos puros, facilitando de estemodo, el estudio, caracterización, aplicacion ycontrol de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propósito específico del estudio.

Los medios de cultivo, para poder ser utilizados y garantizar que los resultados obtenidos a partir de ellos sean confiables, deben cumplir con los siguientes requisitos: 1. Disponibilidad de nutrientes 2. Consistencia adecuada del medio 3. Presencia o ausencia de oxígeno y otros gases. 4. Condiciones adecuadas de humedad 5.Luzambiental 6.pHadecuado 7.Temperatura 8.Esterilidad.Si las condiciones se cumplen, se podrán realizar observaciones de manera eficiente

CULTIVOS DE MICROORGANISMOS

MEDIOS DE CULTIVO

De manera general se denomina “medio de cultivo” a cualquier material que presente una adecuada combinación de nutrientes para permitir el crecimiento o el aumento del número de células de una población microbiana. En los laboratorios de microbiología se utiliza una gran variedad de medios de cultivo para mantener cepas, aislar o identificar microorganismos responsables de la contaminación de alimentos, medicamentos o cosméticos, aislar o identificar microorganismos con el propósito de diagnosticar alguna enfermedad, preparar cultivos masivos de microorganismos para la elaboración de vacunas bacterianas, etc.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVOS

MEDIOS GENERALES

No contienen sustancias inhibidoras, es decir, permiten el crecimiento de muchos tipos de microorganismos, pero si contienen indicadores de productos derivados de la actividad metabólica de los microorganismos sobre algunos de los componentes del medio. Se utilizan para la identificación de los microorganismos. Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar fermentación de carbohidratos.

MEDIOS SELECTIVOS

Son básicamente iguales a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos. Ej. Agar desoxicolato citrato utilizado para el aislamiento de patógenos entéricos.

MEDIOS SELECTIVOS DIFERENCIALES

A veces se combinan en un mismo medio las características de ser selectivo y diferencial. Por ejemplo, el agar McConkey, este medio contiene sales biliares y cristal violeta, que inhiben el crecimiento de las bacterias gram positivas. Pero como también contiene lactosa y un indicador de pH permite distinguir entre las bacterias fermentadoras de lactosa y las que no lo son.

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).

TEMPERATURA

Cada especie bacteriana se caracteriza por un intervalo de temperatura en el cual presenta su crecimiento óptimo. Pero, en general, los microorganismos crecen más rápidamente cuando se aumenta la temperatura, sin llegar hasta un punto en el cual se dañan las proteínas. Así pues, para favorecer un crecimiento rápido, las bacterias se suelen cultivar a la temperatura más alta a la cual crecen bien, y que suele ser la de su medio natural.

Escherichia coli la bacteria que más frecuentemente se utiliza en investigación, se encuentra en el intestino humano y de otros mamíferos. Este microorganismo crece óptimamente a 37ºC, la temperatura del cuerpo humano.

pH

El pH óptimo depende de la especie bacteriana, pero cada una de ellas crece en un intervalo de pH relativamente estrecho. Casi todas las bacterias crecen mejor a valores de pH próximos a la neutralidad, en el intervalo de 6,5 a7, 5. Sin embargo, los hongos crecen mejor entre 4,5 y 6,0.

OXÍGENO

La concentración de oxígeno del medio es un determinante crítico para el crecimiento bacteriano. Algunos microorganismos, a los cuales se denomina

aerobios estrictos, no pueden vivir sin oxígeno porque lo necesitan para obtener energía. Otros microorganismos, llamados anaerobios estrictos, no pueden vivir en presencia de oxígeno, para ellos es un agente tóxico. Otros tipos de organismos, como los anaerobios facultativos los anaerobios aerotolerantes, pueden crecer tanto en presencia de oxígeno como en su ausencia. Los anaerobios facultativos utilizan el oxígeno si disponen de él, pero también pueden crecer sin él. Los anaerobios aerotolerantes no utilizan el oxígeno, pero tampoco les afecta negativamente. Los organismos microaerófilos requieren ambientes con bajas tensiones de oxígeno; las altas tensiones, como las que existen en el aíre son tóxicas para ellos. Por tanto, dependiendo del microorganismo que se vaya a cultivar, se tendrá que suministrar, restringir o eliminar el oxígeno.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Conocer las técnicas de siembra y las condiciones para el crecimiento las bacterias.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Aprender las técnicas de preparación de diferentes métodos de siembra.

Aprender a inocular distintos medios de cultivos contenidos en caja petri.

MARCO TEORICO

La siembra microbiológica es un procedimiento mediante el cual se deposita (siembra) asépticamente un microorganismo en un medio de cultivo. En ellos los microorganismos se multiplicarán produciendo millones de descendientes que formarán unidades macroscópicamente visibles denominadas colonias. El material que contienen los microorganismos que se van a sembrar recibe el nombre de inoculo y este proceso se puede realizar mediante un filamento metálico, que recibe el nombre de asa de cultivo. Siembra por estrías o diseminación (Pentágono) y zigzag consiste en pasar el asa de cultivo con el inoculo sobre la superficie de una placa Petri que contiene el medio de cultivo adecuado para la bacteria que se desea cultivar. Al pasar el asa, haciendo estrías unas separadas de otras, se logra que el inóculo se diluya progresivamente de forma tal que al final de las estrías se obtienen colonias aisladas. En medios sólidos el crecimiento bacteriano se evidencia por la formación de colonias, las cuales pueden presentar entre otras las siguientes características:

Tamaño.- grandes o pequeñas.

Forma.- circular, Irregular, Rizoide, filamentosa

Superficie:-plana, meseta, convexa, umbilicada.

Consistencia.- seca u opaca, húmeda o brillante, Butirosa (mantequilla)

mucosa quebradiza, membranosa.

Pigmento.-pueden o no presentar pigmento, el cual puede estar circunscrito a la colonia (endopigmento) o bien difundir al medio (exopigmento).

Olor.- amoniacal, fecaloideo, dulzón etc.

Hemólisis.- está relacionado con la destrucción de los glóbulos rojos.

Cuadro No 1

PROCEDIMIENTO

* El primer paso es preparar la zona estéril y abrir los medios de cultivo al lado de la estufa.

* Tomamos la muestra y procedimos a sembrar.

METODO POR ESTRIA EN MEDIO SOLIDO EN CAJA PETRI

1. El asa de siembra en anillo debe ser esterilizada en la llama (flameada al rojo), manteniéndola verticalmente en el mechero y enfriarla.

2. Tomar con el asa de siembra en anillo una cantidad suficiente de muestra (o con el hisopo de madera)

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