AISLAMIENTO DE ICROORGANISMOS

Bacteriología[pic 1]

Alumnas: Pamela Jiménez- Karla Loaiza. Docente: Dra. Lourdes Jerves

UNIVERSIDAD DE CUENCA - FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

Ciclo: 7°Ciclo/6°Nivel          Cuenca-Ecuador        Fecha de entrega: 04/11/15

EXAMEN PRACTICO INTERCICLO

TEMA: AISLAMIENTO E IDNTIFICACION DE MICROORGANISMOS MEDIANTE PRUEBAS BIOQUIMICAS.

GRUPO: 5B.

1. OBJETIVOS.

• Aislar microorganismos presentes en muestras biológicas.
• Identificar a los microorganismos presentes en dichas muestras por medio de la realización de pruebas bioquímicas.

1. LOGROS DE APRENDIZAJE VINCULADOS

• Recuperar colonias aisladas de cada uno de los MO presentes en la muestra.
• Identificar el género y especie de lo MO aislados.
• Relacionar el metabolismo de los MO recuperados con el fundamento de las pruebas bioquímicas empleadas para la identificación.

1. BASE TEÓRICA.

MEDIOS PARA PRUEBAS BIOQUIMICAS

Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias objeto de identificación. Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. (Cercenado & Cantón, 2010) Existen diversas pruebas bioquímicas algunas de lectura inmediata así como otras en las que se requiere de más tiempo para poder realizar las lecturas y generar la interpretación de los resultados y así determinar el género y especie de la bacteria o microorganismo aislado.

PRUEBA DE LA CATALASA Y COAGULASA

La prueba de la catalasa básicamente comprende la descomposición del peróxido de hidrogeno es decir se encuentra relacionado con la prueba de la oxidasa ya que descompone el producto final de esta prueba, en otras palabras la catalasa es una enzima que descompone el peróxido de Hidrogeno (H2O2) en agua y oxígeno el peróxido de Hidrogeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo aerobio de los hidratos de carbono (Forbes, Sahm, & Weissfeld, 2007), una prueba complementaria a esta es la prueba de la coagulasa principalmente se emplea esta para la identificación definitiva de S. aureus esta prueba puede ser libre o ligada.

Mecanismo de acción de la coagulasa libre: Procoagulasa (enzima extracelular bacteriana) reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguíneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejo análogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con fibrinógeno formando un coágulo de fibrina en ausencia de Ca2+. (Club de Informática Médica y Telemedicina (Universidad de Panamá), 2009)
La coagulasa ligada o factor de agregación actúa directamente sobre el fibrinógeno y lo convierte en fibrina, no requiere la presencia de activadores plasmáticos.

Coagulasa en tubo: Detecta la producción de la enzima estafilocoagulasa.

Coagulasa en placa: Detecta la producción de una proteína localizada en gran parte del Staphylococo (Cercenado & Cantón, 2010)

• Con lo consultado en la literatura podemos interpretar que las colonias obtenidas dan positivo a la prueba de la catalasa, es decir que estas bacterias poseen la enzima catalasa que descompone el H202 lo cual se puede identificar por la producción de burbujas o efervescencia, esto nos lleva a realizar una prueba de coagulasa la que también podemos interpretas como positiva al obtener un coagulo parcial del plasma lo que nos indica de igual manera que las bacterias presentes en los cultivos poseen enzimas que estimulan la conversión de fibrina en fibrinógeno coagulando así el plasma.

CRITERIOS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE COLONIAS

Existen diversos criterios que podemos tener en cuenta para la identificación de colonias basándonos principalmente en las características que estas presenten, tales como su forma, superficie, color, en si todo a lo que su morfología se refiere para esto es importante también que “el aislamiento de las bacterias haya sido realizado de una manera exitosa teniendo cultivos puros es decir este compuesto por un sol MO procedente de una única célula” Es decir entonces que el aspecto de las colonias es una gran ayuda para que el investigador se guie o tenga una idea para que vaya hacia una correcta identificación del MO. (Cercenado & Cantón, 2010)

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FUENTE: Obtenido de Microbitos Blog recuperado el 14 de Junio del 2010, citado 02 de Noviembre del 2015 disponible en https://microbitos.wordpress.com/2010/06/14/morfologia-colonial-bacteriana/

1. EQUIPOS, MATERIALES Y MÉTODOS

Métodos

El método usado en la práctica fue la tinción de Gram y pruebas bioquímicas como la prueba de Catalasa así como también pruebas complementarias como la prueba de la coagulasa con ayuda de plasma sanguíneo.

PROCESO

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PROCEDIMIENTO

Primero se procede a tomar todas las medidas de asepsia, se procede a realizar tinción de Gram en la muestra dotada por el docente, se realiza la siembra de la muestra en Agar EMB chocolate y Sangre  (por agotamiento) y en el manitol salado se siembra en estría simple, esto se lleva a incubar de 35-37⁰C de 24-48H, en el caso del Agar sangre y chocolate se incuba por el mismo lapso de tiempo y temperatura pero se coloca en condiciones especiales que es que este en un ambiente del 5-10% de CO2, posterior a este tiempo de incubación si se genera crecimiento de colonias anotar las características macro y micro realizar las pruebas bioquímicas según el tipo de bacteria, realizar la identificación del MO.

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