Aislamiento de microorganismos a partir de cultivos microbianos mixtos
Enviado por David Suquillo • 29 de Noviembre de 2015 • Apuntes • 2.243 Palabras (9 Páginas) • 208 Visitas
Pontifica Universidad Católica del Ecuador[pic 1]
Laboratorio de Microbiología
Escuela de Bioanálisis
Bioquímica clínica
Informe N°6
Tema: Aislamiento de microorganismos a partir de cultivos microbianos mixtos
Objetivo
Utilizar métodos de cultivo aprendidos para aislar cultivos puros a partir de cultivos mixtos.
Utilizar la coloración Gram para reconocer el tipo de organismo y medio óptimo para su cultivo.
Observar las cualidades específicas de cada colonia de microorganismos.
Introducción
En la naturaleza los microorganismos se encuentran en un habitad plagado de todo tipo de microorganismos, pero para llegar a estudiarlos a fondo y en el laboratorio se necesita el aislamiento de microorganismo en cultivos puros.
Para poder aislar un microorganismo se necesita, conocer las exigencias de cada microorganismo para poder reproducirse en un medio apropiado, comenzar con un cultivo mixto donde encontramos varios tipos de microorganismos.
En el proceso de aislamiento se debe cultivar hasta obtener colonias individualizadas, estas servirán para observar características morfológicas de cada una y diferenciarlas pos su tipo de formación, para poder diferenciar el tipo de microorganismo y llegar a un cultivo puro, también se debe observar en el microscopio, para esto necesitamos tener como requisito el conocimiento de la coloración Gram.
Con las características de cada medio, observación de microorganismos al microscopio con la coloración Gram se puede determinar un medio apropiado para cada microorganismo de acuerdo a sus características.
Este tipo de aislamiento no puede detectar que microorganismo se encuentra en la muestra para esto es necesario proceder con una prueba de bioquímica, después del aislamiento.
Materiales
Caja monopetri con Agar Sangre | Caldo BHI con cultivo mixto | Placas portaobjetos | Mecheros | Desinfectante |
Caja bipetri con Agar Manitol y MacConkey | Asas | Set de GRAM | Incubadora a 37°C | Papel periódico |
Procedimiento
Aislamiento de microorganismos a partir de cultivos microbianos mixtos
El procedimiento para aislar microorganismos de un cultivo mixto consta de 3 fases:
Fase 1:
Después de poner en práctica los métodos preanalíticos para el manejo de microorganismos abrimos el cultivo mixto y se inocula en agar sangre, este medio es propicio para el crecimiento por su cantidad de nutrientes,
También se realiza una coloración Gram del inoculo inicial para saber que tipo de microorganismos están dentro de la muestra.
Con esto se observa las características morfológicas y físicas de cada microorganismo y colonia para escoger el medio en el que se siembra cada microorganismo.
Fase 2:
Después de diferencias los tipos de colonia presentes en la caja Petri con agar sangre se hace una coloración Gram de cada colonia diferente, para diferencias las características de cada microorganismo que se encontraba en la muestra.
Una vez seleccionados los microorganismos y sus medios óptimos sembramos en la caja bipetri 2 de las colonias encontradas una en cada medio dependiendo del apropiado para el crecimiento, se incuba a 37° por 24 Horas.
Fase 3:
Observar resultados y crecimiento.
Resultados
En el agar sangre se logra ver hemolisis por la falta de color en el medio después de 24 Horas son colonias medianas, circulares, convexas, bordes redondeados, lactosa positivas lo que les da coloración plomiza, la hemolisis es tipo beta.
En la caja bipetri únicamente creció en Mac Conkey Agar, un medio especial para bacilos Gram negativos.
Agar Mac Conkey. Se logran ver crecimiento.
Caja Petri agar sangre
[pic 2]
Coloración Gram Bi Petri manitol /Mc Conkey[pic 3][pic 4]
Conclusiones
Se logró aislar uno de los componentes del inoculo misto inicial bacilos Gram negativos.
La homogenización de la muestra y la aplicación de las técnicas de estriado correctamente son de gran ayuda para la obtención de colonias para un aislamiento fácil.
Consulta
Medios de cultivo utilizados
Sangre Agar Base
Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.
Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observación de reacciones de hemólisis.
También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.
Fundamento
La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemólisis.
Fórmula (en gramos por litro) | |
Infusión de músculo de corazón | 375.0 |
Peptona | 10.0 |
Cloruro de sodio | 5.0 |
Agar | 15.0 |
pH final: 7.3 ± 0.2 |
Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensión homogénea. Calentar con agitación frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20 minutos a 121°C. Enfriar a 45-50°C agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.
Preparación de la placa de Agar Sangre: añadir en forma aséptica un 5% de sangre estéril desfibrinada a temperatura ambiente, el agar debe estar a 45°C.
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