Técnicas De Siembras Para Aislamiento Y Cultivo De Microorganismos

Introducción

Sembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproducción. Las técnicas de siembra varían según el estado físico del medio o las necesidades del microorganismo. Una condición básica de la siembra es que se realice bajo condiciones rigurosas de asepsia, ya que es indispensable evitar el crecimiento de gérmenes del ambiente en el cultivo. A estos microorganismos se les llama contaminantes.

Si el cultivo tiene un solo tipo de microorganismo se le denomina cultivo puro. Cuando encontramos más de un tipo de microorganismo se llama entonces cultivo mixto. El proceso mediante el cual se separan los microorganismos se denomina aislamiento y la forma de sembrar puede realizarse de varias formas, dependiendo de la prueba y del medio de cultivo empleado.

2. Objetivos

* Dominar las técnicas de manejo y aislamientos de microorganismos y en placa de Petri.

* Obtener colonias separadas, utilizando uno o más métodos.

* Estudiar la morfología de cada colonia.

3. Marco Teórico

3.1. Aislamiento

El aislamiento directo es una forma de obtener microorganismos de forma selectiva de sus hábitats naturales. Bajo esta técnica, al extender una población microbiana mixta sobre la superficie de un medio selectivo, previamente solidificado con agar, toda célula que sea capaz de crecer, se desarrollará y formará una colonia. La competencia por los nutrientes entre los microorganismos dispersos en el agar, se reduce drásticamente y de esta forma los microorganismos que crecen de manera lenta, tienen la oportunidad de generar colonias. La técnica de siembra directa en placa sobre medio selectivo, se emplea para aislar diversos microorganismos, mismos que son capaces de reproducirse en las condiciones del medio utilizado (Stanier et al., 1992; citado por Guevara 2010).

El éxito del aislamiento, de la separación sobre el medio de cultivo, depende de la superficie sobre la que se ha distribuido la muestra. Es muy importante realizar el mayor número de estrías posible. En las primeras estrías aparecerán colonias confluentes o una masa continua de microorganismos. En las estrías finales deberán aparecer colonias separadas unas de otras. El aislamiento requiere un reducido inóculo de partida. La sucesiva disminución del tamaño de la población sobre el asa (por descarga sobre el medio de cultivo) al recorrer el medio de cultivo, debe asegurar que finalmente algunas células queden suficientemente separadas (aisladas unas de otras) sobre la superficie.

3.2. Identificación Microbiana

La identificación permite determinar a qué especie pertenece una determinada cepa, mediante un proceso de comparación de diferentes características evaluadas en laboratorio. Cuanta mayor similitud exista entre las particularidades de la cepa estudiada en el laboratorio y las que tradicionalmente manifiesta una especie definida, será mayor la probabilidad de que esa cepa problema corresponda a la especie manifestada (Díaz, 2010ª; citado por Guevara 2010).

Las características empleadas para la identificación de los distintos grupos de microorganismos obedecen a las posibilidades del laboratorio que realiza la investigación, éstas son principalmente de tipo económico y de la relevancia que tenga en el estudio realizado el nivel de identificación microbiana (Díaz, 2010ª; citado por Guevara 2010).

4. Materiales y Equipos

a. Materia Prima

* uva

b. Materiales y equipos

* Placa petri

* Tubos de ensayo

* Agar nutritivo

* Asa de Khole

* Muestras

* Incubadora

* Mechero Bunsen

5. Procedimiento

Las siembras para el aislamiento de hongos y levaduras se hicieron por el método de estrias en las placas petri, uno para levaduras y otro para hongos, y en el tubo por le método de tubos con agar inclinado para levaduras, como se muestra en las figuras 1, 2, 3 y 4.

Figura 1. Separación de los mohos y levaduras para la siembra

Figura 2. Siembra de moho en placa petri por estrías

Figura 3. Siembra de levadura en placa petri por estrías

Figura 4. Siembra de levadura en el agar en tubo inclinado

6. Resultados y Discusiones

Después de 5 días de la siembra se observó las colonias de los mohos y levaduras tanto en las placas petri y en el agar en tubo inclinado. Figura 5, 6 y 7.

Figura 5. Colonias de levaduras en placas petri

Figura 6. Colonias de mohos en placas petri

Figura 7. Colonias de levadura en agar en tubo inclinado

Como se pueden observar en la figura 5 las levaduras crecieron de una cantidad mayor inicialmente y va decreciendo hacia el final del estriado, y las colonias son de color blanquesinas. Mientras que las levaduras en el agar en tubo inclinado son de un color más amarillentas.

En tanto en la figura 6, se puede observar las colonias de los mohos de un color oscuro, con bastante crecimiento y va menorando conforme llega hacia el final de la estría.

7. Conclusión

Por medio de esta práctica se logró utilizar las técnicas aprendidas durante el transcurso del curso. Se logró realizar algunos de los métodos que existen para cultivar las levaduras y los mohos y de esta manera observar sus características,

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