Practica: “EXTRACCION DE ADN DE DIFERENTES TEJIDOS VEGETALES”
Enviado por pums plams • 15 de Noviembre de 2017 • Ensayos • 871 Palabras (4 Páginas) • 410 Visitas
Laboratorio clínico
Biología contemporánea
Practica: “EXTRACCION DE ADN DE DIFERENTES TEJIDOS VEGETALES”
INTRODUCCION
La extracción de ADN requiere una serie de procedimientos básicos para liberarlo y aislarlo. Es necesario romper romper la pared celular y la membrana plasmática a fin de llegar al núcleo de la célula. También debe romperse la membrana nuclear antes de liberar el ADN, y por ultimo hay que protegerlo de enzimas aislándolo generalmente en alcohol etílico o en isopropanol.
Normalmente los científicos usan una técnica, procedimiento o protocolo como punto de partida para iniciar una investigación, mientras desarrollan y mejoran estas técnicas de manera que se ajusten mejor a sus necesidades de su investigación. Puedes probar cambiando estos procedimientos: otro detergente, otra temperatura del agua, variar el tiempo con los reactivos, etc. También puedes seguir estos mismos protocolos para extraer ADN de otros vegetales.
El ADN es soluble en agua pero cuando se encuentra en alcohol se desarrolla y se precipita en la interface entre el agua y alcohol.
OBJETIVO
- Identificar las moléculas de ADN obtenidas en la separación de germen de trigo.
- Obtener muestra de ADN vegetal a través de la extracción al germen de trigo.
- Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quimicas-fisicas del ADN
[pic 1]
MATERIAL:
- Tubos de ensaye de 50 ml
- Tubos de ensaye de 15 ml con tapón de rosca
- Vaso de precipitados de 100 ml
- Agitador
- Gotero pipeta de 10 ml
- Pipeta de 1 ml
- Pipeta Pasteur
- Frasco para almacenar ADN
- Clip
- Papel toalla o papel filtro
SUSTANCIAS:
- 1 g de germen de trigo crudo
- 1 ml de detergente liquido
- 14 ml de etanol al 95 %
- Etanol al 70%
- 20 ml de agua de la llave
PROCEDIMIENTO
- Coloca 1 g de germen de trigo crudo en uno de los tubos de ensaye de 50 ml.
[pic 2]
- Añade 20 ml de agua de la llave a 50.60 °C, mezclando constantemente por tres minutos.
[pic 3] [pic 4]
- Agrega 1 ml de detergente líquido y mezcla suavemente cada minuto por cinco minutos. Intenta no hacer espuma.
[pic 5] [pic 6]
- Con el gotero, la pipeta o pedacitos de papel toalla remueve cualquier rastro de espuma sobre la solución.
[pic 7]
- Ladea el tubo de ensaye y lentamente vierte 14 ml de alcohol por la pared del tubo de manera forme una capa sobre la solución de agua, germen de trigo y detergente. No mezcles ambas soluciones. El ADN se precipita en la interface de agua y alcohol (la interface es la una entre el agua y el alcohol). Por esto, es crucial verte el alcohol muy despacio de manera que forme una capa sobre la solución acuosa. Si el alcohol se mezcla con el agua, se diluye demasiado y el ADN no se precipita.
[pic 8]
- Deja reposar el tubo de ensayo por algunos minutos. Poco a poco aparecerá ADN, pegajoso y de color blanco en donde el agua y el alcohol se tocan. Si todo sale bien, podrás ver ADN precipitándose de la solución en la interface de agua y alcohol tan pronto como vierta este. Si deja reposar la preparación por 15 min más o menos, el ADN flotara sobre el alcohol.
Normalmente se puede obtener una mayor precipitación de ADN de la solución con una de las herramientas colectoras de ADN (tal como la varilla de vidrio o un clip adaptado como gancho) si cuidadosamente se levanta la capa de agua hacia el alcohol y se precipite. Esto permite que una mayor cantidad de ADN entre en contacto con el alcohol y se precipite. Puede ser útil verter la solución de agua y detergente dentro de un tubo de ensaye limpio, dejando en el otro tubo el germen de trigo, antes de añadir el alcohol.
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