Bioensayos De Toxicidad Acuatica

Sufre el Lago de Guadalupe contaminación severa debido a que cada año recibe 15 millones de metros cúbicos de aguas negras, equivalente a una cuarta parte del líquido total de este cuerpo de agua; lo que ha provocado la muerte masiva de peces y otras especies animales.

Los estudios concluyen que la mortandad masiva de peces se debe a la contaminación del lago por descargas de aguas negras domésticas, dijo la funcionaria, quien añadió que el municipio de Nicolás Romero es el que emite mayor cantidad de aguas negras y grises al lago de Guadalupe, con 13 millones de metros cúbicos.

A continuación está Atizapán, con 980 mil metros cúbicos anuales vertidos a los ríos que desembocan al citado cuerpo de agua; también, Cuautitlán Izcalli, Jilotzingo e Isidro Fabela contribuyen con emisiones, aunque en menor medida.

Análisis realizados en el lugar detectaron un millón 100 mil colonias de coliformes fecales por cada 100 mililitros, lo que provoca la pérdida de oxígeno disuelto en el agua y posteriormente la muerte por asfixia de los peces, concluyó Vulling Garza.

La necesidad de llevar a cabo bioensayos de toxicidad acuática en muestras

ambientales se basa en que los organismos vivos constituyen la herramienta

esencial para evaluar la calidad del medio ambiente acuático ya que se comportan

como indicadores de las alteraciones actuales o potenciales de estos ambientes.

Los estudios toxicológicos resultan de suma utilidad en la evaluación de calidad de

aguas de lagos, embalses y ríos que están afectados por vuelcos de descargas

industriales y/o municipales, ya que permiten medir el impacto producido por el o

los efluentes en cuestión. Daphnia magna es una de las especies más

frecuentemente utilizada en evaluaciones toxicológicas por Institutos y Agencias

de control ambiental internacionales.

El objetivo del presente estudio es evaluar la toxicidad aguda en muestras de agua

extraídas en estaciones correspondientes al Programa de Calidad de Aguas y

Control de la Contaminación del Río Uruguay. (PROCON ) con la finalidad de

establecer el nivel de base para el curso principal del río, en el marco del Digesto

sobre Usos del Río Uruguay.

Se llevaron a cabo ensayos de toxicidad aguda empleando microcrustáceos de

agua dulce en 47 muestras de agua subsuperficial y profunda extraídas en el

curso principal del río durante 3 (tres) campañas de muestreo que se llevaron a

cabo en junio/2000, junio/2001 y agosto 2001, respectivamente. Los ensayos se

realizaron conforme a la norma ISO 6341 (E), 1989.

Es importante notar que no se detectó toxicidad aguda para Daphnia magna en

ninguna de las muestras analizadas luego de 24 Hs de exposición.

Resulta importante la continuidad de estos estudios incluyendo las áreas costeras

con mayor influencia de contaminación antrópica.

4.2 Bioensayo de toxicidad aguda con Daphnia magna

María Consuelo Díaz Báez, Yolanda Pica Granados y Alicia Ronco

4.2.1 Principio

Dentro del grupo de cladóceros, las especies del género Daphnia son las más utilizadas como organismos de prueba o de referencia en pruebas de toxicidad. La amplia distribución geográfica, el importante papel que cumplen al interior de la comunidad zooplanctónica, la facilidad de cultivo en el laboratorio, la reproducción partenogenética (lo cual asegura una uniformidad de respuesta) y el corto ciclo de vida con la producción de un alto número de crías, han hecho de este grupo un ideal para la evaluación de toxicidad, de carácter universal.

El género Daphnia se ubica dentro del orden cladócera de la clase crustácea, y especies como Daphnia magna, Daphnia pulex y Daphnia similis, son utilizadas extensivamente en pruebas de toxicidad, por lo cual existe una extensa información sobre las técnicas de cultivo, los requisitos de temperatura, luz y nutrientes, así como su respuesta a muchos tóxicos. Específicamente, los ensayos de toxicidad con Daphnia magna (ver figura 4.2.1 en anexo fotográfico) permiten determinar la letalidad potencial de sustancias químicas puras, aguas residuales domésticas e industriales, lixiviados, aguas superficiales o subterráneas, agua potable y agua de poro de sedimentos, entre otros.

En las pruebas de toxicidad con D. magna, neonatos menores de 24 h de edad son expuestos a la muestra o compuesto a probar, por un periodo de 48 h, al término del cual se cuantifica el número de organismos muertos. Con estos resultados se establece la proporción o porcentaje de mortalidad producida.

4.2.2. Materiales, reactivos y equipos

Material biológico

Las hembras partenogenéticas de D. magna pueden obtenerse directamente de compañías proveedoras de materiales biológicos, quienes certifican la especie. También pueden ser obtenidas de otras fuentes como laboratorios especializados donde se llevan a cabo pruebas de toxicidad con este cladócero o por medio de su recolección en campo; en estos casos, la especie deberá ser taxonómicamente identificada.

Materiales de laboratorio

• Acuarios de 3 L de capacidad.

• Vaso de precipitado de 2 000, 1 000 y 600 mL.

• Pipetas volumétricas y graduadas de 1, 2, 5, 10 y 20 mL.

• Matraz aforado de 100 mL.

• Pipetas Pasteur y bulbos de látex.

• Pipetas volumétricas de 1, 2, 5 y 10 mL, peras para pipetas.

• Pipetas automáticas de 250, 500 y 1 000 mL; puntas para micropipetas.

• Recipientes plásticos de 30, 50 y 100 mL.

• Papel aluminio.

• Garrafón o bidón de veinte litros.

• Manguera delgada para bombas de acuario.

• Matraz Kitasato de dos litros.

• Platos para pesar reactivos.

• Espátulas.

• Hielera y hielo o geles refrigerantes.

• Papel Parafilm.

• Tubos de ensayo.

Reactivos

• NaHCO3

• MgSO4

• KCl

• CaSO4•2H2O

• Biotina.

• Tiamina.

• Vitamina B12

• Na2SeO4

• K2Cr2O7

• Agua deionizada o destilada.

Equipos

• Microscopio estereoscópico.

• Balanza analítica.

• Plancha de agitación con magneto.

• Bombas para acuario.

• Controlador de temperatura ambiente (equipo de aire acondicionado u otro).

• Refrigerador (4± 2 °C).

• Bomba de vacío.

• Mechero de Bunsen.

• Autoclave o equivalente.

• Medidor de oxígeno disuelto.

• Potenciómetro.

• Tituladores para dureza y alcalinidad.

• Termómetro.

• Sistema purificador de agua (deionizador, sistema Milli-Q) o una fuente de abastecimiento de agua destilada.

• Centrífuga.

4.2.3 Cultivo y mantenimiento de los organismos de prueba

Los cultivos de D. magna pueden mantenerse en recipientes de uno, dos o tres litros, o cualquier otro sistema que resulte funcional. Con el fin de mantener condiciones óptimas para el crecimiento de los individuos, se recomienda una densidad poblacional no mayor de 12 individuos por litro.

Los organismos se mantienen en agua reconstituida con una dureza entre 160 y 180 mg CaCO3/L. El agua se prepara en el laboratorio (APHA, 1998) y puede suplementarse con una solución de vitaminas y selenio cuando se detecten problemas en la reproducción, o se presente una alta mortalidad entre los 14 y 21 días por malformación de las antenas (ver figura 4.2.2 en anexo fotográfico).

Los cultivos se mantienen a una temperatura de 21± 2 °C, un fotoperiodo aproximado de 16 h luz/8 h oscuridad y una intensidad lumínica de alrededor de 800 lux (ver condiciones en tabla 4.2.1).

Agua dura reconstituida (APHA, 1998)

Para su preparación se recomienda colocar en un garrafón: 19 L de agua deionizada o destilada y adicionar 2,4 g de MgSO4, 3,84 g de NaHCO3 y 0,16 g de KCl. Agitar hasta disolver completamente las sales. Paralelamente, disolver 2,4 g de CaSO4•2H2O en 1L de agua deionizada o destilada. Es necesario tener en cuenta que la disolución de esta sal puede requerir un periodo de tiempo prolongado. Terminada la solubilización de la sal, incorporar la solución de CaSO4•2H2O al garrafón, lo cual permitirá obtener veinte litros de agua dura reconstituida.

Suplementos (adicionar sólo en caso de un crecimiento deficiente del cultivo)

Cuando se determine la necesidad de suplementar el agua dura, deben prepararse por separado las soluciones de biotina, vitamina B12, tiamina y selenito de sodio (Na2SeO4) (Elendt & Bias, 1990), de la siguiente forma:

Solución de biotina 0,0075 g/L

Solución de vitamina B12 0,010 g/L

Solución de tiamina 0,075 g/L

Solenito de sodio (Na2SeO4) 0,010 g/L

Las soluciones preparadas se deben mantener refrigeradas (4± 2 °C) y pueden almacenarse por un periodo de hasta seis meses. Para un volumen de veinte litros de agua dura reconstituida, se adicionan los siguientes volúmenes de cada una de las soluciones: tiamina (20 mL), vitamina B12 (4 mL), biotina (2 mL) y selenito de sodio (4 mL).

Tabla 4.2.1. Resumen de las condiciones recomendadas para el mantenimiento de cultivos de Daphnia magna.

Temperatura 20± 2 °C

Calidad de luz Fluorescente, blanco-frío

Intensidad luminosa 600-1000 lux (luz blanca fría) en la superficie del líquido

Fotoperiodo 16 horas luz/8 oscuridad

Recipientes de mantenimiento Los cultivos

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