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PREINFORME DE PRÁCTICA No. 3 ENSAYOS ENZIMATICOS CUALITATIVOS

OBJETIVOS

• Entender el papel de las enzimas como catalizadores de los diferentes procesos bioquímicos y su importancia en los diferentes procesos metabólicos.

• Analizar reacciones cualitativas la actividad enzimática de la sacarasa y alfa- amilasa.

• Establecer relaciones entre la estructura y la función de las enzimas y pérdida de esta al variar al variar su temperatura optima de trabajo.

FUNDAMENTO TEÓRICO

1. Que es la sacarasa, cuál es su sustrato, a qué clase de enzima pertenece, cuáles son sus productos de hidrolisis. En que consiste la prueba de Fehling y para qué clase de carbohidratos es indicativa, porque se usa la prueba anterior en la actividad de la sacarasa?

2. Estructura química del substracto para la alfa- amilasa, enlaces que rompe o hidroliza la amilasa, clase de enzima que es la amilasa, productos de la hidrolisis de la amilasa, en que consiste la reacción de lugol el almidón?, ¿Qué entiende por temperatura optima de una enzima, en el cuerpo donde se encuentra esta amilasa?, que se entiende con pH óptimo de una enzima?

3. Estructura del almidón y su mecanismo de hidrolisis: enzimas implicadas.

RESPUESTAS:

• DEFINICION: conocida también como invertasa, es una enzima que convierte la sacarosa (azúcar común) en glucosa y fructosa.

• Está presente en el intestino delgado, en el borde del cepillo de las vellosidades intestinales.

• Pertenece a la familia de las disacaridasas, que son las enzimas que se encargan de romper los disacáridos en los monosacáridos que los forman.

• La ausencia de sacarasa provoca una enfermedad denominada intolerancia a la sacarosa, de difícil diagnóstico, muchas veces se confunde con la intolerancia a la lactosa.

Tipos

• EC 3.2.1.10 es sacarasa-isomaltasa

• EC 3.2.1.26 es invertasa

• EC 3.2.1.48 es sacarosa alfa-glucosidasa

Fisiología

Intolerancia a la sacarosa se produce cuando sacarasa no se secreta en el intestino delgado. Con intolerancia a la sacarosa, el resultado del consumo de sacarosa es el exceso de producción de gas y, a menudo diarrea y mala absorción. Intolerancia a la lactosa es un trastorno relacionado que refleja la incapacidad de un individuo para hidrolizar el disacárido lactosa.

Sacarasa es secretada por las puntas de las vellosidades del epitelio en el intestino delgado. Sus niveles se reducen en respuesta a las vellosidades-embotamiento eventos tales como la enfermedad celíaca y la inflamación asociada con el trastorno. Los niveles aumentan en el Embarazo/Lactancia y diabetes como la hipertrofia de las vellosidades.

El reactivo de Fehling, es una solución descubierta por el químico alemán Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinación de azúcares reductores.

El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:

• Sulfato cúprico cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml.

• Sal de Seignette (tartrato mixto de potasio y sodio), 173 g; solución de hidróxido de sodio al 40%, 3 g; agua, hasta 500 ml.

Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitación del hidróxido de cobre (II).

El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehído. Éste se oxida a un ácido carboxílico y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a óxido de cobre(I), que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reacción es que la forma aldehído puede detectarse fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad. Si un azúcar reduce el licor de Fehling a óxido rojo, se dice que es un azúcar reductor.

Esta reacción se produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no reductores pueden enolizarse dando lugar a un falso positivo.

Amilasa

La amilasa, denominada también sacarasa o ptialina, es un enzima hidrolasa que tiene la función de catalizar la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 del componente α-amilasa al digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples. Se produce principalmente en las glándulas salivales (sobre todo en las glándulas) y en el páncreas. Tiene actividad enzimática a un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre (amilasemia).

CLASIFICACION.

α-amilasa

(Nombre alternativos: 1,4-α-D-glucano-glucanohidrolasa; glucogenasa).

Las amilasas son enzimas dependientes de cloruro, completamente afuncionales en ausencia de iones de cloruro. Actúan a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos, descomponiéndolos en dextrina desde la amilopectina. Dado que puede actuar en cualquier punto de la cadena es más rápida que la β-amilasa. En los animales es una enzima digestiva mayor y su pH óptimo está entre 6,7 y 7,2.

β-amilasa

(Nombres alternativos: 1,4-α-D-glucano-maltohidrolasa; amilasa sacarogénica).

Otra forma de amilasa, la β-amilasa es también sintetizada por bacterias, hongos y plantas. Actúa desde el extremo no reductor de la cadena, catalizando la hidrólisis del segundo enlace α-1,4, rompiendo dos unidades de glucosa (maltosa) a la vez. Durante el proceso de maduración de la fruta la β-amilasa rompe el almidón en azúcar dando lugar al sabor dulce de la fruta. La amilasa presente en el grano de cereal es la responsable de la producción de malta. Muchos microorganismos también producen amilasa para degradar el almidón extracelular. Los tejidos animales no contienen β-amilasa, aunque puede estar presente en microorganismos sapófitos del tracto gastrointestinal. Tiene un pH óptimo de 4 - 5.

γ-amilasa

(Nombres alternativos: Glucano 1,4-α-glucosidasa; aminoglucosidasa; Exo-1,4-α-glucosidasa; glucoamilasa; α-glucosidasa lisosómica;

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