Bioquimica

FACULTAD DE CIENCIAS, Departamento de Ciencias Básicas, Bioquimica BIO-005

Practico n°3 Cuantificación Espectrofotométrica de Aminoácidos y Proteínas.

 Introducción

El potencial de Hidrógeno (pH) sirve para medir el grado de acidez o basicidad de las sustancias. Esto tiene enorme importancia en muchos procesos tanto químicos como biológicos; como los aminoácidos, los cuales son moléculas orgánicas compuestos por un grupo denominado amino (-NH2) y otro grupo carboxilo (-COOH), estos son libres y poseen características de acido-base. Estos grupos funcionales susceptibles de ionización dependen de los cambios del PH, además poseen importancia en los sistemas amortiguadores para mantener la homeostasis del organismo, los cuales constan de un sistema acuoso compuesto por una mezcla de acido-base, estos son capaces de resistir grandes cambios de pH al añadirle pequeñas cantidades de otro acido o base. (R.bohinsky). por lo tanto el taponamiento es el resultado de dos equilibrio de reacciones reversibles que tienen lugar en una disolución con concentraciones casi iguales del dador de protones y de su aceptor de protones conjugado. Los conocimientos obtenidos de pH y de una solución buffer realizados en una actividad práctica aplicarlos a conceptos teóricos.

 Objetivos.

• Identificar el comportamiento de un tampón

• Lograr crear un grafico de titulación de un aminoácido.

• Observar el momento en que un aminoácido se comienza a comportar como amortiguador.

• Los conocimientos obtenidos de pH y de una solución buffer realizados en una actividad practica aplicarlos a conceptos teóricos.

 Procedimiento

A- comparación entre la capacidad amortiguadora del suero salino y un buffer.

Al comienzo del laboratorio se enumeraron seis tubos de ensayos, cada uno representaba diferentes soluciones en donde al primero se le agregaron 11 ml de suero salino seguidamente al segundo tubo se le añadieron 10 ml de la misma solución nombrada anteriormente junto con 1 ml de HCl, posteriormente al tercer tubo se e agregaron 10 ml de suero salino más 1 ml de NaOH, luego al cuarto tubo solo se le agrego 1 ml de suero salino con 10ml de Buffer fosfato de pH= 7, por consiguiente al quinto tubo se le depositaron 10 ml de Buffer fosfato y además 1 ml de HCl, por último al sexto tubo se le añadieron 10 ml de buffer fosfato junto con 1 ml de NaOH. Después de realizado lo anterior se le agrego a cada tubo tres gotas de pH azul de bromotimol, se cubrieron con una cinta para poder agitar la solución. Por último se observaron los colores obtenidos en cado tubo.

B- Determinación de la curva de titulación para un aminoácido.

Para realizar este experimento, se necesita añadir 50 ml de triptofato (0.6%p/v; pH=2,00) a un matraz Erlenmeyer de 250 ml, a continuación se deben añadir 5 gotas de bromotimol y medir el pH correspondiente a la mezcla. Luego en una bureta se deben añadir 50 ml de una solución patrón de NaOH (0,1 M), con este instrumento se irá incorporando 5 ml de la solución anterior, a la disolución de triptofato; después de cada adición de debe medir su pH, hasta completar los 50 ml de la solución de NaOH.

 Resultados.

• En el experimento número uno, se observa un cambio de colores en las sustancia que contienen los tubos de ensayo, debido a un cambio de pH que sufre

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