CARBOHIDRATOS Comprobar la presencia de la catalasa en el tejido

Instituto Tecnológico de Tepic[pic 1]

Ingeniería Bioquímica

Materia: Bioquímica

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INTRODUCCIÓN

OBJETIVO

Comprobar la presencia de la catalasa en el tejido

Metodología:

• Material:
• 21 Tubos de ensayo.
• 1 gradilla.
• 1equipo de calentamiento.
• 5 Pinzas para tubos de ensayos.
• Baño maría.
• Pipetas de 5 ml.
• Jeringas.
• 1 Gotero.
• 1 vaso de 100 ml

Reactivos

• Soluciones de prueba: Glucosa, fructosa, sacarosa y ribosa, al 1% en agua. Deben conservarse en el refrigerador.
• Reactivo de Molisch b) Líquido: Disolución de alfa-natanol en etanol, al 1%.
• Reactivo de Benedict: Puede emplearse la disolución comercial o tabletas “Clinitest”. En caso de que se requiera preparlo, deberá pesar 17.3. de citrato  de sodio, 9 g. de caebonato de sodio y 1.73 g. de O. Mezclarlos bien, disolver en agua y completar a 100 ml. en un matraz aforado.[pic 6]
• Reactivo de Seliwanoff: Disolver 0.7 g. de resorcinol en 100ml. de HCl concentrado. Agregar agitando, 100 ml de agua destilada. Guardar en frasco ámbar y prepararlo inmediatamente antes de usarlo.
• Reactivo de Bial: Disolver 1 g de orcinol en 100 ml de HCl concentrado. Agregar a esta solución 0.025 g de  disueltos en 2.5 ml de agua. Guardar en frasco ámbar y prepararlo inmediatamente antes de usarlo.[pic 7]
• Reactivo de Bencidina: Disolver 2 g de clorhidrato de bencidina en 50 ml de ácido acético glacial. Prepararlo inmediatamente antes de usarlo.

PROCEDIMIENTO

1. Reacciones de Molisch.

Esta y las demás pruebas deben realizarse con cada uno de los carbohidratos y con el problema que se le suministrará individualmente. La prueba de Molisch puede efectuarse con el reactivo sólido o en fase líquida:

1. Con líquidos: En un tubo de ensayo pequeño, coloque 1 ml de disolución de prueba (su problema, disuélvalo en agua al 1%) y agregue 5 gotas de reactivo de Molisch, sin agitar. Incline ligeramente el tubo y deje deslizar por las paredes del mismo una gota o dos de ácido sulfúrico concentrado. No agite. Observe el color que se va a desarrollando a partir de las interfaces de los dos líquidos.

Si su problema da negativa la reacción de Molisch, no necesita efectuar con el las otras pruebas, informando que no es carbohidrato.

1. Otras reacciones.

Para la reacción de benedict, Seliwanoff, Bial y con bencidina prepare una serie de tubos debidamente etiquetados, 4 de cada disolución de prueba y 4 de su problema (al 1% en agua), o sea 20 tubos en total. Ponga 1 ml de disolución en cada uno y agregue 1 ml de cada reactivo, según el cuadro. Sumerja los tubos de una misma serie simultáneamente, en un baño de agua hirviente. Anote el tiempo que tarda en aparecer el color, y el tono del mismo de cada tuvo. Si después de 15 minutos no aparece ningún cambio de color, anote la reacción como negativa. Anote los resultados en el cuadro:

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