COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS EN AMINOÁCIDOS: CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
Enviado por 0106911951 • 22 de Noviembre de 2022 • Informes • 1.336 Palabras (6 Páginas) • 54 Visitas
Práctica # 7
COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS EN AMINOÁCIDOS: CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
Valeria Carchipulla, Julissa López, Emily Muñoz
Docente: Andrea Cabrera
Universidad de Cuenca, Facultad de Ciencias Químicas, Carrera de Bioquímica y Farmacia, Asignatura: Bioquímica I, Subgrupo: 1, Cuenca – Ecuador, Fecha de entrega: 22/11/2022
- Resumen
La práctica de laboratorio se realizó mediante el método de cromatografía en papel cuyos componentes son la fase móvil y la fase estacionaria, con el fin de identificar los aminoácidos resultantes de la hidrólisis de albúmina y globulina. Para poder reconocer los aminoácidos primero se realizó una cromatografía en papel del patrón que contenía todos los aminoácidos conocidos, este patrón nos sirvió al momento de tomar las medidas de cada de uno de los aminoácidos que fueron arrastrados en el papel de la globulina y albúmina, por el solvente. Luego de la cromatografía fue necesario realizar la revelación de los papeles mediante el uso de ninhidrina cuya propiedad es colorear los aminoácidos violeta-púrpura para poder identificar la distancia que recorrieron en el papel. La distancia recorrida es utilizada para calcular el factor de elución. Mediante éste se logró identificar los aminoácidos que componen la albúmina y globulina por lo que se evidencia la hidrólisis a la que fue expuesta la proteína.
- Objetivo
Identificar la presencia de aminoácidos en hidrolizados de albúmina y globulina mediante métodos de cromatografía. Asimismo evidenciar características de los aminoácidos, mediante su composición y comportamiento frente a compuestos como la Ninhidrina o reacciones de hidrólisis ácida.
- Equipos, instrumentos y reactivos
Materiales y Equipo | Reactivos |
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- Marco Teórico
La cromatografía es una técnica que sirve para la separación de sustancias o mezclas y para identificar sus componentes químicos, mayormente las mezclas homogéneas debido a la dificultad que implica su separación. Esta técnica consta de dos componentes que son la fase estacionaria y la fase móvil. La fase estacionaria es donde se coloca la muestra de la sustancia a separarse y la fase móvil es el gas o líquido que fluye a través de la fase estacionaria moviendo a su vez a los componentes de la muestra, es decir, separándolos. La fluidez de los componentes de la muestra dependen de su naturaleza y la afinidad que poseen tanto con la fase estacionaria como con la fase móvil, por lo que los componentes se moverán en la fase móvil o permanecerán en la fase estacionaria. (Ondarse, 2021; Quimicafacil.net, 2018)
La cromatografía de papel consta de papel que puede ser especialmente para cromatografía, papel filtro o papel común como fase estacionaria y de un líquido como fase móvil, la muestra se coloca en el extremo inferior del papel y este a su vez se coloca sobre el solvente, que es menos polar y por lo general se encuentra compuesto por uno o más solventes orgánicos y agua, de este modo se empapa ligeramente la superficie inferior del papel, gracias a la propiedad de capilaridad el solvente subirá a lo largo de la fase estacionaria separando la mezcla y empujando los componentes por afinidad. (Ondarse, 2021)
Posterior a la cromatografía de ser necesario se realiza la revelación para hacer visible el recorrido que siguieron los componentes de la muestra, estos son medidos y se usan para calcular el coeficiente de elución, mediante la siguiente fórmula: (Ondarse, 2021)
El método de la cromatografía en papel es muy útil al momento de identificar los aminoácidos que conforman una proteína, luego de que ésta ha pasado por una hidrólisis, es decir, la secuencia de la proteína ha sido rota, de manera que los aminoácidos se encuentran fraccionados y son arrastrados por el solvente sobre el papel, necesariamente el papel debe ser revelado, para este proceso se utiliza la ninhidrina cuyos componentes reaccionan con los aminoácidos dando lugar a un color violeta-púrpura a excepción de la prolina que genera una coloración amarilla. (Aguilar et al., 2014) [pic 1]
- Procedimiento
[pic 2]
- Resultados
Cálculos
Cisteína Rf= =01 [pic 3] | Alanina Rf= =0,07[pic 4] | Lisina Rf= =0,32[pic 5] | Valina Rf= =0,19[pic 6] | Triptófano Rf= =6.1[pic 7] |
Glicina Rf= =0,025[pic 8] | Glutamina Rf= =0,035[pic 9] | Histidina Rf= = 0,05[pic 10] | Metionina Rf= =0,2[pic 11] | Leucina Rf= =0,32[pic 12] |
Asparagina Rf= =0,02[pic 13] | Tiroxina Rf= =0,22[pic 14] | Arginina Rf= =0,02[pic 15] | Isoleucina Rf= =0,38[pic 16] |
1 Rf= =0,07[pic 17] | 2 Rf= =0,051[pic 18] | 3 Rf= =0,02[pic 19] | 4 Rf= =0,07[pic 20] | 5 Rf= =0,045[pic 21] |
6 Rf= =0,004[pic 22] | 7 Rf= =0[pic 23] | 8 Rf= =0[pic 24] | 9 Rf= =0,113[pic 25] | 10 Rf= =0,014[pic 26] |
11 Rf= =0,066[pic 27] | 12 Rf= =0,523[pic 28] | 13 Rf= =0,486[pic 29] | 14 Rf= =0,4[pic 30] |
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