CONTROL DE CEPAS

Tema :Conservación de las cepas microbianas

Objetivos:

Preservar la pureza genética del cultivo

Preservar los niveles de su productividad inicial

Lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad

Métodos de conservación de las cepas microbianas:

Método de obtención o conservación a largo plazo:

Es uno de los métodos mas eficientes ya que en este se detiene el crecimiento de las células microbianas, sin provocar la muerte, garantizando la estabilidad genética, al evitarse la aparición de generaciones sucesivas

• Conservación por congelación

Disminuye la actividad metabólica de una célula a muy bajas temperaturas por la disminución del agua disponible.

Se utiliza nitrógeno liquido (-196 °C)

Se puede recuperar los microorganismos, descongelándonos en un baño a 37-40ºC.

• Conservación por liofilización

Se basa en la paralización del metabolismo celular por falta de agua: congelación y sublimación

Las células liofilizadas se guardan en tubos al vacío paraevitar rehidratación o presencia de gases (como el oxígeno)que pueden dañar las células.-Condiciones de almacenamiento.La temperatura debe ser constante a 18ºC y sin bajar de los0ºC y, en oscuridad

Estas dos técnicas minimizan al máximo el riesgo de cambio genético en las células y las mantienen viables por 10 años o más, ventajas que han condicionado su extensa utilización para conservar disímiles materiales biológicos (cultivos de hongos, bacterias y levaduras, algas, suero, células sanguíneas, entre otros)

Métodos Alternativos

Se utiliza en caso de que las cepas no puedan resistir los tratamientos de aplicación de ,los métodos aplicados a largo plazo; se recomienda usar varios métodos alternativos no solo uno.

• Conservación por transferencia periódica o subcultivos

Técnica que consiste en la resiembra periódica del cultivo en un medio nutritivo fresco:

En esta técnica el cultivo no dispone de oxigeno ni de nutrientes.

Los cultivos se mantienen a 4°C durante lapsos que oscilan entre 15 días y 2 meses.

Útil para algas y cianobacterias.

• Conservación por suspensión en agua destilada o en agua de mar estéril

Consiste en suspender en agua estéril, unas cuantas células del cultivo que se quiere conservar.

Se lo utiliza en la conservación de hongos filamentosos como en levaduras y algunas bacterias

Métodos Restringidos

Esta técnica se emplea para detener el crecimiento de las células al eliminar el agua disponible (actividad acuosa) de microorganismos que no soportan ni la congelación ni la liofilización . Esta técnica se da por decantación en diferentes soportes (arena, sílica, gel, perlas de vidrio)

La viabilidad de los cultivos se da de 2 a 5 años.

Ejemplo:

Los métodos más eficaces de conservación de Salmonella typhimurium lo constituyen la liofilización en primer lugar y la congelación a -80 ºC como método alternativo para un corto periodo de tiempo, las pruebas fenotípicas utilizadas como parámetros de calidad nos permiten definir cual es el método ideal de conservación. Bajo nuestras condiciones

experimentales, para el caso de las cepas TA 98, 100 y 102 evaluadas durante 3 años, el

mejor método de conservación es la liofilización con mantenimiento a 4ºC, sin

modificaciones significativas en el efecto mutación his y la frecuencia espontánea de

reversiones.

Zulia Weng , Olvido Díaz y Inalvis Álvarez,2005, Conservación de microorganismos: ¿qué debemos conocer?, disponible en línea en : http://bvs.sld.cu/revistas/hie/vol43_3_05/hie06305.htm

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