Cuji en medio de cultivos bacterianos

MATERIALES Y MÉTODOS

La investigación se realizará en el Laboratorio de Microbiología adscrito al Instituto de Química y Tecnología de la Facultad de Agronomía de la Universidad Central de Venezuela en la ciudad de Maracay, estado Aragua. Para el desarrollo de los objetivos propuestos, la metodología estará constituida por las siguientes fases:

Recolección de frutos de Enterolobium cyclocarpum.

Se recolectarán en estado maduro y sanos (sin perforaciones por insectos o daños por hongos), una vez caídos de los árboles localizados las instalaciones de la Facultad de Agronomía de la Universidad Central de Venezuela, núcleo Maracay y sus alrededores durante los meses de febrero y marzo, correspondientes al período de fructificación de los árboles de esta especie (época seca). Se almacenarán en envases plásticos cerrados herméticamente y guardarán bajo refrigeración hasta su procesamiento.

Obtención de la harina de E. cyclocarpum,

Los frutos enteros serán secados en estufa eléctrica a 60°C durante 3 días o hasta alcanzar una consistencia OOOO que permita la posterior molienda en molino eléctrico de martillo y tamizado a través de tamiz de 80 mesh. Obtenida la harina de caro-caro (HC) se envasará en frascos de vidrio y mantendrá sitio fresco y seco.

Determinación de características físico-químicas de la harina

Se determinarán contenidos de humedad, proteínas, azúcares totales y azúcares reductores de las harinas obtenidas a partir de frutos enteros mediante los métodos de secado en horno,  Kjeldahl y XXXXX, respectivamente. Normas COVENIN QUE LOS SUSTENTAN

Preparación de los medios de cultivo.

Se prepararán suspensiones al 10 % de las harinas de fruto entero E. ciclocarpum en agua destilada sustituyendo parcial y totalmente parte de los componentes básicos de un agar nutritivo comercial, como lo son la peptona y el extracto de carne. Esta suspensión será filtrada a través de una bolsa de tela para eliminar posibles sedimentos que interfieran con la evaluación del crecimiento bacteriano y por último se incorporará el agar y calentará agitando constantemente hasta ebullición. Previo al proceso de calentamiento se medirá el pH resultante y ajustará hasta obtener un valor final de 7.2 utilizando NaOH 0,1N ó HCL al 1%, según sea necesario. Finalmente, la suspensión resultante se esterilizará siguiendo las indicaciones para un agar nutritivo comercial (121°C/15 min).

Se elaborarán tres formulaciones contentivas de harina de caro-caro y un medio de cultivo general (agar nutritivo) de tipo comercial.

Las formulaciones para preparar 100 ml de medio de cultivo serán las siguientes:

Formulación 1. (Agar nutritivo comercial): 3 g extracto de carne (EC) + 5 g peptona (P) + 12 g agar (A)

Formulación 2: 10 g HC + 5 g P + 12 g A

Formulación 3: 3 g EC + 10 g. HC + 12 g A

Formulación 4: 10 g HC + 12 g A

Preparación del inóculo bacteriano.

Se utilizarán 3 especies bacterianas categorizadas según sus necesidades  nutricionales en: altamente exigente (Streptococcus pyogenes), medianamente exigente (Staphylococcus aureus subsp. Aureus, CVCM 456 ) y no exigente (Escherichia coli, CVCM 39 ). S. pyogenes  será suministradas por la Licenciada, bacterióloga Ysvette Vásquez del Laboratorio de bacteriología del Hospital “Los Samanes” de Maracay, las demás especies forman parte del cepario de docencia del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Agronomía, UCV y son provenientes del Centro Venezolano de Colección de Microorganismos, adscrito a la misma institución.  

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