Medios De Cultivos

CLASIFICACIￓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.

Se pueden clasificar atendiendo a distintos criterios:

ATENDIENDO A SU ESTADO FￍSICO:

ﾷ L￭quidos: favorecen mucho el desarrollo y multiplicaci￳n de las bacterias

porque al difundirse estas por todo el medio encuentran f￡cilmente las

sustancias que necesitan para nutrirse. No contienen agar.

ﾷ S￳lidos: contienen de 15 a 17 g de agar por litro. Las bacterias crecen

con mayor dificultad; no obstante, son de gran utilidad para el estudio de

las caracter￭sticas de crecimiento, de la producci￳n de hem￳lisis y otras

peculiaridades.

ﾷ Semis￳lidos: se utilizan mucho para observar la movilidad de los

microorganismos. Contienen agar en una proporci￳n de 3 a 5 g. por litro.

ATENDIENDO A SU UTILIDAD:

GENERALES O COMUNES:

Son apropiados para el cultivo de la mayor￭a de los microorganismos por la

facilidad con que se desarrollan en ellos. Se usan para cultivar bacterias poco

exigentes.

Entre ellos podemos citar el caldo nutritivo, el TSB, el agar nutritivo y el TSA.

MEDIOS ESPECIALES:

Conocidos tambi￩n como espec￭ficos, van dirigidos al cultivo de determinadas

especies bacterianas o son utilizados con fines de diferenciaci￳n.

Entre ￩stos tenemos:

A) MEDIOS ENRIQUECIDOS: son medios generales a los que se les a￱ade

ciertos productos (sangre, suero, glucosa,...), favoreciendo as￭ el crecimiento de

ciertos microorganismos muy exigentes. Ejemplos: agar-glucosa (agar nutritivo

a￱adido de glucosa), agar sangre (agar nutritivo a￱adido de sangre), agar

chocolate, etc.

B) MEDIOS SELECTIVOS: estos medios contienen componentes que inhiben el

desarrollo de ciertos microorganismos, lo cual permite aislar el microorganismo

que se busca. Entre estos medios podemos citar: agar Salmonella-Shigella (agar

SS, selectivo para Salmonellas y Shigellas), agar MacConkey (se utiliza para el

aislamiento de Enterobacterias), agar de Thayer-Martin (selectivo para

Neisseria), agar Manitol salado (Chapman, selectivo de Estafilococos coagulasa

positivos), agar de Lowenstein-Jensen (selectivo para el cultivo de

micobacterias, especialmente Mycobacterium tuberculosis, agar de Sabouraud

(para el cultivo de la mayor￭a de las levaduras y hongos pat￳genos).

C) MEDIOS DIFERENCIALES: son aqu￩llos en los que adem￡s de crecer las

bacterias, al actuar ￩stas sobre alguno de los componentes espec￭ficos del

medio, demuestran alguna de sus propiedades bioqu￭micas. Contienen

azcares e indicadores, concebidos para provocar una respuesta bioqu￭mica

conocida (si la bacteria es capaz de fermentar el azcar que lleva el medio, se

producir￡ una acidificaci￳n del medio con el consiguiente viraje de color del

medio por el cambio de pH).

Ejemplos:Agar hierro de Kligler, Agar de MacConkey (diferencia los bacilos

ent￩ricos fermentadores y no fermentadores de la lactosa.

Fermentadores de lactosa---> colonias rosas;

No fermentadores de lactosa (lactosa negativos) ---> colonias incoloras).

D) MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO: son medios l￭quidos que favorecen o

permiten la multiplicaci￳n de unas bacterias, inhibiendo parcial o totalmente la de

otras. Ejemplos: agua de peptona alcalina (favorece la multiplicaci￳n de Vibrio

cholerae), caldo selenito (favorece el crecimiento de Salmonellas y Shigellas,

fundamentalmente Salmonellas).

E) MEDIOS DE TRANSPORTE: se utilizan para asegurar la viabilidad de las

bacterias desde el momento de la toma de las muestras hasta su posterior

siembra en el laboratorio o para su env￭o de unos laboratorios a otros.

Actualmente los medios de transporte m￡s utilizados son los de Stuart, Amies, y

el medio de Cary-Blair.

F) MEDIOS DE CONSERVACIￓN: son una variaci￳n de los medios de

transporte. Aseguran las caracter￭sticas morfol￳gicas y fisiol￳gicas de las

bacterias por un periodo largo de tiempo. Ejemplo: agar de tripticasa y soja.

Un gran nmero de medios de cultivo utilizados en el laboratorio de

microbiolog￭a se podr￭an englobar en varios de los grupos anteriormente

expuestos. Ej.: agar sangre, es un medio enriquecido y diferencial.

E.M.B. Agar.

Este medio (tambi￩n denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de r￡pido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento

Este medio combina las f￳rmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciaci￳n entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est￡ dada por los indicadores eosina y azul de metileno; ￩stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un caracter￭stico brillo met￡lico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporaci￳n de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene adem￡s, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

F￳rmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona 10.0 Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullici￳n durante 1 o 2 minutos hasta su disoluci￳n. Esterilizar en autoclave a no m￡s de 121ﾰC durante 15 minutos. Enfriar a 45ﾰC y distribuir agitando suavemente.

Lactosa 5.0

Sacarosa 5.0

Fosfato dipot￡sico 2.0

Agar 13.5

Eosina 0.4

Azul de metileno 0.065

pH final: 7.2 ﾱ 0.2

Siembra

En superficie, por estriado a partir de un in￳culo poco denso, para obtener colonias aisladas.

En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

Incubaci￳n

De 24 a 48 horas a 35-37 ﾰC, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Tipo de Colonia

Escherichia coli ATCC 25922 Verdosas con brillo met￡lico y centro negro azulado

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Mucosas, rosa prpura, confluentes

Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, peque￱as, puntiformes

Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras

Caracter￭sticas del medio:

Placas preparadas: color prpura.

La esterilizaci￳n del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color prpura se restaura por agitaci￳n. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.

Manitol Salado Agar.

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciaci￳n de estafilococos.

Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patog￩nicos a partir de muestras cl￭nicas, alimentos, productos cosm￩ticos y otros materiales de importancia sanitaria.

Tambi￩n, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies hal￳filas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.

Fundamento

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentraci￳n salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicar￡n en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitr￳geno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentraci￳n) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompa￱ante, y el rojo fenol es el indicador de pH.

Las bacterias que crecen en un medio con alta concentraci￳n de sal y fermentan el manitol, producen ￡cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.

Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.

Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.

Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura.

F￳rmula (en

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