CÉLULAS SANGUÍNEAS Y SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEDAS E IDENTIFICACIÓN DE CÉLULAS T

CÉLULAS SANGUÍNEAS Y SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEDAS E IDENTIFICACIÓN DE CÉLULAS T

1. Introducción

1. Materiales  

-Heparina

-Histopaque

-Pipetas Pasteur

-PBS

-Guantes

-Tubos con sangre

-Set de tinción hematológica

-Portaobjetos

-Cubreobjetos

-Microscopio

-Aceite de inmersión

-Centrífuga

1.  Procedimientos

• Separación de mononucleares: primero se comenzó con la preparación de la gradiente, en un tubo de centrífuga se depositó 1 ml de Histopaque al fondo del tubo, por la pared del mismo tubo se deslizó suavemente 1ml de sangre heparinizada cuidando que no se mezclaran las soluciones, luego se procedió a centrifugar el tubo a 1750 rpm por 30 minutos, se retiró con cuidado los tubos de la centrífuga (la utilización de la centrífuga estuvo a cargo de los docentes del laboratorio) y se diferenciaron diferentes capas desde el fondo del tubo globulos rojos y segmentados – Histopaque – mononucleares – plaquetas y plasmas, luego de esto se retiró y descartó el plasma con ayuda de pipeta Pasteur, se recibió en otro tubo (marcado) la capa de mononucleares, después se agregó a cada tubo con mononucleares 2 ml de PBS, para lavarla, se mezcló suavemente y se centrifugó a 1500 rpm por 5 minutos, se descartó el sobrenadante de los tubos y con el sedimento de células se realizó un frotis, se extrajo una gota del sedimento y se colocó en el porta objetos y se realizó el extendido de mononucleares, el cual se dejó secar. Cuando el frotis ya estuvo seco se procedió a introducirlo en alcohol, en eosina y en azul de metileno, siete veces en cada uno de ellos, después de cada uno de estos se fue sacando el exceso de líquido del frotis en toalla absorbente. Finalmente se lavó en PBS y se dejó secar.
• Observación de frotis: cuando el frotis teñido se secó, se colocó en el microscopio, se observó con aumento menor, luego con aumento de 40X y finalmente se agregó una gota de aceite de inmersión y se observó con objetivo de 100X en el cual se reconoció células mononucleares y polimorfonucleares .
• Formación de rosetas: Se mezcló 100 microlitros de eritrocitos de carnero y 100 microlitros de mononucleares, se agregó 20 microlitros de de suero fetal bovino (previamente inactivado por calor por 30 minutos a 56°C), luego se centrifugó a 1000 rpm durante 5 minutos, después se realizó un frotis, se dejó secar y se tiñó igual que en el procedimiento de separación de mononucleares, se dejó secar y se observó e identificó linfocitos.

1. Imágenes
2. Discusión

1.  Conclusión: LA HAGO YOO
2. Bibliografía

Para quien haga la discusión tengo que el suero modifica el potencial de interaccion la hace más estable ya que afecta en las fuerzas de repulsión

ESAS SON TODAS LAS IMÁGENES QUE ME CONSEGUÍ, NO LAS ROTULÉ, DEBERIAN HABER LINFOCITOS MONOCITOS Y PLAQUETAS, LINFOCITOS B Y T . IGUAL REVISEN EL PROCEDIMIENTO QUE NO RECUERDO BIEN QUE HICIMOS

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