DETERMINACION DEL ADN

Laboratorio #16 – Determinación de ADN

Introducción

La estructura de doble hélice del ADN, que los investigadores James Watson y Francis Crick propusieran en el año 1953 proporcionó respuestas a muchas preguntas que se tenían sobre la herencia. Predijo la autorreplicación del material genético y la idea de que la información genética estaba contenida en la secuencia de las bases que conforman el ADN. Más aún, con el correr de los años y de las investigaciones, se pudo determinar que todos los seres vivos contienen un ADN similar, formado a partir de las mismas unidades: los nucleótidos.

Este código genético mediante el cual se “escriben” las instrucciones celulares es común a todos los organismos. Es decir que el ADN de un ser humano puede ser “leído” dentro de una bacteria, y una planta puede interpretar la información genética de otra planta diferente.  A esta propiedad de la información genética se la conoce como “universalidad del código genético”.

El ADN está formado por unos componentes químicos básicos denominados nucleótidos. Estos componentes básicos incluyen un grupo fosfato, un grupo de azúcar y una de cuatro tipos de bases nitrogenadas alternativas. Para formar una hebra de ADN, los nucleótidos se unen formando cadenas, alternando con los grupos de fosfato y azúcar.

Los cuatro tipos de bases nitrogenadas encontradas en los nucleótidos son: adenina (A), timina (T), guanina (G) y citosina (C). El orden, o secuencia, de estas bases determina qué instrucciones biológicas están contenidas en una hebra de ADN. Por ejemplo, la secuencia ATCGTT pudiera dar instrucciones para ojos azules, mientras que ATCGCT pudiera indicar ojos de color café.

En el caso de los seres humanos, la colección completa de ADN, o el genoma humano, consta de 3 mil millones de bases organizados en 23 pares de cromosomas, y conteniendo alrededor de 20,000 genes.

Objetivos

• Determinar la presencia del ADN en diferentes compuestos animal o vegetales.
• Conocer los componentes estructurales que forman el ADN.
• Investigar el tipo de pentosa que se encuentra en el ADN.

Procedimientos

1. Preparacion de la uestra

• Agregar agua destilada a la muestra
• Triturar (licuadora)
• Centrifugar 2000rpm por 3min

1. Solucion amortiguadora

• NaCl 3g
• NaHCO3 6g
• Jabon líquido 3mL
• Todo esto se disuelve en 200 ml de agua destilada

1. Mezclar 10 ml de muestra+20mL solución amortiguadora

• Centrifugar 3min a  2000rpm
• Recoger del sobrenadante 5mL en un tubo grande
• Agregar isopropanol frio para la formacion de dos capas
• Extraer el ADN

1. Identificar desoxiribosa

• 2mL de ADN + 3mL R.Bial
• Poner en baño maría (plato caliente)

1. Color verde determinara la prueba positiva º

Análisis

El objetivo de este laboratorio fue extraer ADN de un alimento e identificar la desoxirribosa, un monosacárido de cinco carbonos que forma parte de la estructura de los nucleótidos del ADN. En teoría, esto se iba a lograr utilizando un Reactivo Bial para detectar pentosas, ya que la desoxirribosa es una pentosa. Si la muestra tornaba color verde, la prueba era positiva para desoxirribosa.

En este laboratorio, luego de agregar el Reactivo Bial a la muestra de ADN y dejar el tubo de ensayo en baño María por varios minutos, se observó que la muestra no cambio de color (permaneció color marrón), por ende, la prueba dio negativa. Originalmente pensábamos que el experimento había fallado porque el ADN se había desnaturalizada al momento de introducir la muestra al baño María a una temperatura muy elevada, por un periodo prolongado. No obstante, la profesora aclaró que era más bien necesario desnaturalizar el ADN para que se liberara la pentosa, para que esta pudiera reaccionara con el reactivo.

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