DISCUSIONES Y ANALISIS CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

CROMATOGRAFIA[pic 1][pic 2]

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INTRODUCCION.

La cromatografía es la separación de una mezcla de dos más compuestos por distribución diferencial entre dos o más compuestos por distribución diferencial entre dos fases un estacionario y otra móvil. Hay varios tipos de cromatografía según la naturaleza de las dos fases involucradas y si los compuestos son retenidos en la fase estacionaria por adsorción o partición. Según la naturaleza de las dos fases, las cromatografías pueden ser sólido-líquido (cromatografías en columna, en capa delgada y en papel, liquido-liquido y gas-liquido (en fase de vapor)

DISCUSIONES Y ANALISIS

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

1)Como primer paso se preparó la columna de cromatografía, se puso un trozo de algodón en el fondo de la columna, agregamos poco hexano para retirar las burbujas que pueda provocar el algodón y se empaquetó con la mezcla de silica-gel y hexano-acetato de etilo (10:0). Se llenó hasta la mitad con la silica y se mantuvo el goteo hasta que quedara solo un poco del disolvente por encima de la silica-gel. Esto constituyó la fase estacionaria (polar).[pic 6][pic 7]

 2)Se adicionó el soluto: extracto de espinacas, el cual contenía carotenos (poco polares), xantofilas (medianamente polares) y clorofila (mas polares). Después se adicionó el disolvente, hexano-acetato de etilo (se utilizó la mezcla de los dos disolventes, uno poco polar y otro medianamente polar, para controlar la separación de los componentes) con una concentración (8:2), lo que constituyó la fase móvil (no polar).

3)Se observó que se separó el color amarillo y comenzó a descender a través de la silica-gel. De acuerdo a la afinidad de polaridad del soluto con el disolvente, los carotenos fueron los primeros en ser arrastrados por la fase móvil. Una vez que todo el líquido amarillo salió, se obtuvieron 7 tubos coloridos.

3)Se mantuvo la concentración de eluyente, hexano-acetato de etilo (8:2) ya que la polaridad de las xantofilas, seguía siendo similar a la polaridad de la fase móvil.  El color gris empezó a descender a través de la silica-gel, las xantofilas fueron arrastradas más rápido por el eluyente, debido a la afinidad de polaridad con este, ambos medianamente polares. Se obtuvieron 2 tubos coloridos, y apareció un tiempo muerto que dio 1 tubo incoloro.[pic 8][pic 9]

4)Se procedió a cambiar la concentración del eluyente a (7.3), empezó a descender el color verde, esto debido a la afinidad de la clorofila con el eluyente, porque al cambiar de concentración aumentó su polaridad (de la fase móvil) y arrastro a la clorofila.

 Tabla 2. Separación de componentes por cromatografía en columna

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Por último, se realizó la cromatografía en placa fina, se utilizo una cromatoplaca a la que se le hicieron 2 lineas como límite de 0.5 cm de distancia a los bordes. En 2 puntos equidistantes, en uno se puso el extracto de espinaca de la practica anterior y otro punto se puso un poco de las xantofilas obtenidas en la cromatografía en columna, se metieron en la cámara con el disolvente hexano-acetato de etilo (8:2)  y se observó que al hacer contacto con la fase móvil, los componentes del primer punto (extracto de espinacas) empezaron a separarse y a ubicarse en diferentes posiciones en la cromatoplaca, el color amarillo, después el color gris y a bajo el color verde y el punto de color gris se movió y quedo por la mitad de la cromatoplaca (no apareció ningún otro color, lo que indico que la xantofila se separó de manera pura) [pic 10][pic 11]

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