Cromatografia En Columna

INTRODUCCIÓN

La cromatografía en columna es quizá el método más general, utilizado para la separación, a la vez que para la purificación, de diferentes compuestos orgánicos que se encuentren en estado sólido o líquido.

En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias al exterior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el eluyente o fase móvil. Seguidamente la mezcla orgánica que nos interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase estacionaria, y así la fase móvil podrá ir atravesando el sistema.

Los compuestos que se encuentran disueltos en la fase móvil, poco a poco saldrán de la columna cromatográfica, y se recogen en fracciones. Las fracciones menos polares, que son por lo general las que se retienen poco o nada en el absorbente, serán las primeras en salir de la columna. En cambio, las sustancias más polares, quedan retenidas por más tiempo en el absorbente, y a menudo es necesario el uso de diferentes disolventes con la finalidad de incrementar su polaridad para que sean arrastradas por estos.

El absorbente mayormente utilizado para las cromatografías en columna, es el gel de sílice. A veces, en sustitución del gel de sílice, cuando éste es incompatible con la mezcla a cromatografiar, se utilizan la alúmina o el florisil (silicato magnésico).

Cuando vamos a realizar una cromatografía en columna, lo primero que debemos hacer es elegir un disolvente adaptado para nuestro caso, para así optimizar la separación de los componentes de la mezcla. Dicha operación se produce a través de cromatografía analítica en capa fina. La variante más influyente en la eficacia de la separación de la cromatografía a media presión usando gel de sílice es el diámetro de la columna, así como la cantidad de gel utilizado.

Para elegir el disolvente, primero se lleva a cabo una cromatografía en capa fina de la muestra a analizar. El disolvente debe producir una buena separación de los componentes de la mezcla en la placa, colocando el componente menos polar a un Rf cercano a 0.3. En el caso de columnas pequeñas, lo ideal es usar un eluyente menos polar que el conseguido en el resultado de la cromatografía en placa.

Según el tipo de interacción que se establece entre los componentes de la mezcla y la fase móvil y estacionaria podemos distinguir entre:

a) Cromatografía de adsorción. La fase estacionaria es un sólido polar capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.

b) Cromatografía de partición. La separación se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil, que son ambas líquidas.

c) Cromatografía de intercambio iónico. La fase estacionaria es un sólido que lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar por aquellos iones presentes en la fase móvil.

Algunas aplicaciones de la cromatografía en columna son:

1. Separaciones de componentes de plantas medicinales.

2. Separación de componentes de una síntesis orgánica.

3. Separación de colorantes.

4. Separación e identificación de hioscina y de morfina.

5. Separación de ácido acético, alcohol cetílico y metil-etil cetona.

6. Separación e identificación de los compuestos intermedios de una síntesis orgánica, por ejemplo en la síntesis del naftaleno, identificación de acido ftálico, anhídrido ftálico, benceno.

7. En la producción sintética de acetaminofen, identificación de la imina de la N-acetilbenzoquinona.

8. Identificación de levo-alfa-acido aminoadípico, durante la biosíntesis de penicilina.

9. Identificación de 8-nitroisoquinolina, durante la síntesis de Ciprofloxacina, un antibiótico.

Factores que influyen en una separación por cromatografía en columna. (En una cromatografía de adsorción).

 Temperatura: A menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase.

 La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire

 Pureza de los disolventes.

 Polaridad del eluyente seleccionado, una sustancia polar se desplazara más fácilmente en un eluyente polar.

 Masa de la muestra: Muestras de gran masa tardan más en ser purificadas.

OBJETIVOS

• Comprender la técnica de cromatografía en columna y utilizarla para la separación de paracetamol de un medicamento que lo contiene (Agrifen).

• Utilizar la técnica de cromatografía en capa fina para reconocer en qué frascos viales tenemos la sustancia de interés.

• Destilar el contenido de los frascos viales con la sustancia de interés para obtener dicha sustancia.

RESULTADOS

Disolución Distancia recorrida (mancha) (cm) Distancia recorrida

(eluyente) (cm) Rf

Eluatos

1

2

3

4

5

6

0

1.4

1.4

1.3

1.2

1.0

4.1

4.1

3.9

3.9

3.9

3.9

0

0.34

0.36

0.33

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