CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

Objetivos

• General: aplicar cromatografía en capa fina y en columna para separar los pigmentos del chile guajillo.
• Particular: elegir mediante cromatografía en capa fina la mezcla de eluyentes adecuados para separar los diferentes pigmentos del chile guajillo.

Resumen

En la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza en el laboratorio de Química Orgánica de tercer semestre se realizó la práctica de cromatografía en capa fina y cromatografía en columna.  Llevándose a cabo primero la cromatografía en capa fina para hacer una buena elección de la mezcla de eluyentes para obtener una buena  separación de los pigmentos y en seguida se realizó la cromatografía en columna obteniéndose un buen resultado de la separación de los pigmentos en dicha cromatografía.

Materiales

Método experimental

• Preparación del chile guajillo

1. Cortar la cola del chile guajillo y partirlo a la mitad para retirarle las semillas y las venas del chile.
2. Cortar el chile en cuadros pequeños y vaciarlos en un frasco de vidrio con tapa (asegurarse que el frasco cierre perfectamente).
3. Agregar acetato de metilo en el frasco aproximadamente un cuarto y en seguida taparlo.
4. Finalmente cubrir todo el frasco con papel aluminio y dejarlo reposar aproximadamente de 2 días a una semana.

• Preparación de la papilla y activación de las placas

1. En un vaso de precipitados agregar  silica gel para cromatografía en capa fina con un poco de agua destilada (preparar para aprox. 12 placas) para disolverlo con ayuda de una varilla de vidrio y que quede una pasta con una consistencia no tan aguada.
2. Vaciar cuidadosamente la mezcla a cada uno de nuestros portaobjetos para que la mezcla quede untada uniformemente en cada uno de ellos (solamente ayudarse con el vaso de precipitados).
3. Una vez que se vayan llenando los portaobjetos, colocarlos en una charola de aluminio para meterlos a la estufa a 110°C  por 30 minutos.

• Ensayo para la elección de la mezcla de eluyentes

1. Llenar 4 frascos de vidrio (etiquetados con el nombre de cada uno de los eluyentes) con 2mL del eluyente.
2. Con ayuda de un capilar partido a la mitad con una punta larga y fina, sumergirlo en el frasco donde se encuentra el chile y colocar una gota en una esquina inferior del portaobjetos.
3. Meter el portaobjetos en el frasco del eluyente y dejar que el eluyente suba uniformemente por el portaobjetos. Sacar el portaobjetos del frasco antes de que llegue hasta arriba (aprox. 1cm debajo de la altura total).
4. Medir con una regla la distancia hasta donde corrió el compuesto  y la distancia hasta donde subió el eluyente.

Nota: Se realizaron los pasos 2 y 3 con cuatro repeticiones. En la primera fue acetato de etilo, en la segunda hexano, en la tercera benceno y en la cuarta dicloro etano.

• Elección mediante ensayo y error de la mezcla de eluyentes para cromatografía en capa fina

• Mezcla 1:

1. Llenar un frasco de vidrio con 1mL de acetato de etilo+ 1mL de hexano.
2. Con ayuda de un capilar partido a la mitad con una punta larga y fina, sumergirlo en el frasco donde se encuentra el chile y colocar una gota en una esquina inferior del portaobjetos.
3. Meter el portaobjetos en el frasco del eluyente y dejar que el eluyente suba uniformemente por el portaobjetos. Sacar el portaobjetos del frasco antes de que llegue hasta arriba (aprox. 1cm debajo de la altura total).
4. Medir con una regla la distancia hasta donde corrió el compuesto y la distancia hasta donde subió la mezcla de eluyentes.

• Mezcla 2:

1. Llenar un frasco de vidrio con 0.3mL de acetato de etilo+ 1.7mL de hexano.

Nota: Repetir del paso 2 al 4 de la mezcla 1.

• Mezcla 3:

1. Llenar un frasco de vidrio con 1mL de dicloro etano+ 1mL de hexano.

Nota: Repetir del paso 2 al 4 de la mezcla 1.

• Mezcla 4:

1. Llenar un frasco de vidrio con 1mL de benceno+ 1mL de hexano.

Nota: Repetir del paso 2 al 4 de la mezcla 1.

• Mezcla 5:

1. Llenar un frasco de vidrio con 2mL de benceno.
2. Meter el portaobjetos obtenido de la mezcla 4 en el frasco con benceno.
3. Observar la elución obtenida. Se tomara esta mezcla como la más adecuada para llevar a cromatografía en columna.

• Preparación de la silica gel para cromatografía en columna con chile guajillo

1. Colocar un poco de silica gel en un vaso de precipitados y agregarle un poco de nuestra muestra de chile guajillo.
2. Revolver con ayuda de una varilla de vidrio hasta que el disolvente se haya evaporado y quede un polvo color rojo-anaranjado.

• Preparación de la silica gel para cromatografía en columna con la mezcla de benceno + hexano

1. Agregar en un vaso de precipitados silica gel con 20mL de benceno y disolver no es su totalidad.

• Llenado de la columna

1. Colocar una “bolita” de algodón muy pequeña en el fondo de la columna con ayuda de un pedazo de alambre largo.
2. Verter en la columna la disolución de silica gel con benceno y dejar que fluya (colocando previamente un vaso de precipitados debajo de la columna para que ahí se contenga el benceno que va a fluir).
3. Repetir el paso anterior dos o tres veces. Tener en cuenta que la silica gel se tendrá que quedar contenida en la columna.
4. Verter la silica gel con chile guajillo en la columna y en seguida verter un poco de benceno.

Nota: nuestra columna tendrá que estar llenada de la siguiente manera; silica gel con la mezcla, silica gel con chile guajillo y benceno. Cada uno de ellos debe distinguirse  en la columna.

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