Determinacion De Amilasa

Determinación de amilasa

Introducción :

La amilasa, denominada también sacarasa o ptialina, es un enzima hidrolasa que tiene la función de catalizar la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 del componente α-Amilosa al digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares (sobre todo en las glándulas parótidas) y en el páncreas. Tiene actividad enzimática a un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre (amilasemia).

Objetivo:

Demostrar la existencia de amilasa en la saliva

Materiales:

Tubos de ensayo

manto

Termómetro

Almidón

Lugol

Saliva

Vaso precipitado

Procedimiento::

1. En primer lugar, colocamos en un tubo de ensayo saliva y le añadimos lugol para comprobar que no reacciona sin presencia de almidón.

2. A continuación, añadimos en otro tubo de ensayo almidón y le echamos lugol para comprobar que reacciona.

3.Seguidamente, en un nuevo tubo de ensayo añadimos almidón con saliva para que la amilasa actúe con el almidón y lo separe en moléculas mas sencillas: glucosa y maltosa.

4. La temperatura adecuada para que se de la reacción es de 36.5ºC , ya que se acelera esta reacción (temperatura corporal) por lo que lo calentamos hasta que alcance el calor indicado. al calentarlos en un vaso precipitado con agua destilada , los tubos deben ser medidos la temperatura con el termómetro.

5. Lo dejamos reposar para que enfríe y, una ves frío, le añadimos lugol para comprobar que no hay presencia de almidón.

DETERMINACIÓN DE LIPASA

Introducción :

La lipasa es una enzima ubicua que se usa en el organismo para disgregar las grasas de los alimentos de manera que se puedan absorber. Su función principal es catalizar la hidrólisis de triacilglicerol a glicerol y ácidos grasos libres. Las lipasas se encuentran en gran variedad de seres vivos.

Esta enzima en humanos se encuentra en la leche materna y, según estudios bioquímicos, es idéntica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancreática no específica), por lo que se supone que el origen es pancreático y llega a las glándulas mamarias a través de la circulación sanguínea. La función principal de esta lipasa gástrica es ayudar a la absorción de grasas.

Como la enzima es capaz de hidrolizar los triglicéridos a di- y mono-glicéridos y ácidos grasos libres, el método para determinar actividad de lipasa en alimentos se basa en la valoración del ácido acético liberado.

Materiales :

Matraz erlenmeyer

Alícuota

Termómetro

Acido acético

Reactivos:

-Substrato: triacetina 0,31 M, pH 6,2.

-Hidróxido de sodio 0,05 N.

Preparación de la muestra:

Una cantidad de muestra se trata con agua destilada a 30°C en una mezcladora eléctrica, se centrifuga o filtra y el sobrenadante constituye el extracto enzimático.

Procedimiento:

En un matraz Erlenmeyer se colocan 48,0 ml del substrato triacetina y se agrega una alícuota del extracto enzimático; ambos deben estar previamente a 30°C, manteniendo a esta temperatura la mezcla final durante 30 minutos. El ácido liberado se titula con NaOH 0,05 N.

Dato:

Una corresponde a la cantidad de enzima que bajo las condiciones de ensayo libera 1 micromol de ácido acético/min.

Determinación de proteasa

Las peptidasas (antes conocidas como proteasas) son enzimas que rompen los enlaces peptídicos de las proteínas. Usan una molécula de agua para hacerlo y por lo tanto se clasifican

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