Determinacion De La Tm Por El Metodo De Hervido

GENETICA MOLECULAR

OBTENCION DE DNA MICROBIANO POR EL METODO DE HERVIDO Y DETERMINACION DE LA Tm

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

MAESTRA:

GRUPO: 24089

EQUIPO: 2

INTEGRANTES:

CUATRIMESTRE: ENERO-ABRIL2013

INTRODUCCION

Las bacterias son microrganismos con una extraordinaria capacidad de adaptación a diferentes condiciones ambientales. Para comprender la esencia de esta capacidad es importante conocer las bases de su genética, es decir como esta organizada la información genética, como realizan y regulan su expresión, que mecanismos de variación génica poseen.el conocimiento del modo de funcionamiento genético de las bacterias, sumado al hecho de que estos microrganismos son de relativo fácil manejo en el laboratorio, que en general tienen un rápido crecimiento, ha llevado a que podamos utilizarlos para sintetizar productos útiles a la medicina, tanto para el diagnóstico como para la prevención y tratamiento de varias enfermedades. Estas posibilidades se han visto incrementadas a partir del desarrollo de la ingeniería genética y la disponibilidad de técnicas de biología molecular. (Freire et al.,2006)

Toda la información genética esencial para la vida de la célula bacteriana, está contenida en una única molécula de ADN de doble cadena, circular y covalentemente cerrado, a la que podemos referirnos como “cromosoma bacteriano”. Muchas bacterias, poseen además ADN extra cromosómico, también circular cerrado, denominado ADN plasmídico, por estar contenido en estructuras llamadas “plásmidos”, que portan información génica para una variedad de funciones no esenciales para la célula en condiciones normales de crecimiento.En términos bioquímicos, la composición y estructura de los ácidos nucleicos bacterianos, es la misma que para cualquier célula. Brevemente, conviene recordar que los ácidos nucleicos son macromoléculas compuestas de nucleótidos unidos en forma covalente por Medio de enlaces fosfodiester entre los carbonos de las posiciones 3´ y 5´ de dos residuos de azúcares adyacentes, que conforman un esqueleto de azúcares y fosfatos que es constante a lo largo de toda la macromolécula. (Smeds et al., 2007)

La variación entre los distintos nucleótidos que conforman la cadena de ácido nucleico, esta dada por sus bases nitrogenadas, que en el casodel ADN son Adenina (A), Timina (T), Citocina (C) y Guanina (G), y en el caso del ARN en vez de T se encuentra Uracilo (U). A y G se denominan bases púricas o purinas, mientras que T, U, y C se denominan bases pirimidínicas o pirimidinas. De esta manera, una cadena o hebra de ácido nucleico, tendrá una estructura primaria determinada por la secuencia de las bases que la componen. El ADN como macromolécula, esta compuesto por 2 cadenas nucleotídicas o hebras antiparalelas, que se enlazan entre si conformando una doble hélice. Los enlaces entre las dos hebras de ADN están dados por puentes de hidrógeno entre las purinas de una cadena con las pirimidinas de la otra. De esta forma, la A forma dos puentes de hidrógeno con la T, mientras que la C forma 3 puentes de hidrógeno con la G. A esto se le llama complementariedad de bases, es decir que la A es complementaria a la T y la C lo es a la G. Estos enlaces permiten mantener estable la estructura de la doble hélice de ADN en la que pueden distinguirse pares de nucleótidos o mejor dichopares de bases(pb).Estos pb pueden utilizarse como unidad de tamaño o longitud para las moléculas de ADN, y de esa manera podemos decir que el ADN cromosómico de Escherichia coli tiene un tamaño de 4,2 millones de pb o lo que es lo mismo 4.200 kilobases (Kb). (Sun y Sun, 2001).

Como sabemos, todas las células deben enfrentarse al problema de como lograr contener en su estructura moléculas tan grandes como el ADN. Volviendo al ejemplo de E. coli, los 4.200 Kb de su genoma, implican una longitud de 1,3 mm, es decir unas 1.000 veces la longitud de la célula. Las bacterias, no poseen histonas asociadas a su genoma y por tanto no tienen la posibilidad de compactar su ADN en estructuras tipo nucleosomas como las células eucariotas. Por lo tanto, deben solucionar el dilema de como compactar su cromosoma de otra manera. Esto se logra, porque el ADN circular cerrado es capaz de adoptar una estructura terciaria denominada de “superenrollamiento”, que implica el enrollamiento del eje de la doble hélice sobre si mismo Este superenrollamiento se dice que tiene sentido negativo, porque es en el sentido contrario al del enrollamiento de una hebra de ADN sobre la otra, y supone para la bacteria una fuente de almacenamiento de energía para ser utilizada en una variedad de procesos fisiológicos que la requieren, como por ejemplo la separación de las 2 hebras de ADN necesaria para la replicación y la transcripción. El cromosoma bacteriano, es suficientemente largo como para formar varios lazos circulares, que como tales pueden a su vez superenrollarse, formando de esta manera una serie de dominios topológicos independientes. Esta organización en dominios, colabora al estado de compactación general del genoma bacteriano, e impide que con la ruptura de una hebra en un punto cualquiera del cromosoma, se pierda el total del superenrollamiento, manteniendo de esta forma la energía almacenada. Las bacterias poseen enzimas capaces de alterar la estructura del ADN modificando su superenrrollamiento. Estas enzimas que se denominan genéricamente "topoisomerasas", actúan introduciendo o eliminando vueltas “superhelicoidales”, cumpliendo un importanterol en los procesos de replicación y transcripción del ADN. Por otra parte, es interesante mencionar que algunas de estas topoisomerasas, como la ADN girasa, son blanco de acción

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