Determinacion De Proteinas Totales

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTAL

I. OBJETIVOS

Determinación cuantitativa en una muestra de carne seca por el método de Kjeldahl.

II. FUNDAMENTO

El método Kjeldahl mide el contenido en nitrógeno de una muestra. El contenido en proteína se puede calcular seguidamente, presuponiendo una proporción entre la proteína y el nitrógeno para el alimento específico que está siendo analizando, tal y como explicaremos más adelante.

Este método puede ser dividido, básicamente en 3 etapas: digestión o mineralización, destilación y valoración. El procedimiento a seguir es diferente en función de si en la etapa de destilación el nitrógeno liberado es recogido sobre una disolución de ácido bórico o sobre un exceso conocido de ácido clorhídrico o sulfúrico patrón. Ello condicionará la forma de realizar la siguiente etapa de valoración, así como los reactivos empleados. En este artículo docente se explica el primer procedimiento, cuando el nitrógeno se atrapa sobre ácido bórico.

III. MARCO TEORICO

ETAPA DE DIGESTIÓN:

Un tratamiento con ácido sulfúrico concentrado, en presencia de un catalizador y ebullición convierte el nitrógeno orgánico en ión amonio, según la ecuación:

Catalizadores/ calor

n - C -NH2 + H2SO4 CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2

Procedimiento: Se introducen de 1 a 5 g de muestra un tubo de mineralización y se ponen 3 g de catalizador que suele estar constituido por una mezcla de sales de cobre, óxido de titanio o/y óxido de selenio. De forma habitual se utiliza como catalizador una mezcla de K2SO4: CuSO4: Se (10:1:0,1 en peso). Después se adicionan 10 mL de H2SO4 concentrado y 5 mL de H2O2. Posteriormente se digiere a 420 ºC durante un tiempo que depende de la cantidad y tipo de muestra.

Se sabe que la digestión ha terminado porque la disolución adquiere un color verde esmeralda característico.

En esta etapa, el nitrógeno proteico es transformado en sulfato de amonio por acción del ácido sulfúrico en caliente. En la actualidad, para llevar a cabo este proceso se utilizan digestores automáticos que son capaces de digerir un número determinado de muestras al mismo tiempo

ETAPA DE DESTILACIÓN:

Se alcaliniza la muestra digerida y el nitrógeno se desprende en forma de amoniaco. El amoniaco destilado se recoge sobre un exceso desconocido de ácido bórico

(NH2)SO4 + 2 NaOH → 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

NH3 + H3BO3 → NH4 + H2BO3

Procedimiento: Después de enfriar se adicionan al tubo de digestión 50 mL de agua destilada, se pone en el soporte del destilador y se adiciona una cantidad suficiente de hidróxido sódico 10 N, en cantidad suficiente (50 mL aprox.) para alcalinizar fuertemente el medio y así desplazar el amoniaco de las sales amónicas. El amoniaco liberado es arrastrado por el vapor de agua inyectado en el contenido del tubo durante la destilación, y se recoge sobre una disolución de ácido bórico (al 4 % p/v).

ETAPA DE VALORACIÓN:

La cuantificación del nitrógeno amoniacal se realiza por medio de una volumetría ácido-base del ión borato formato, empleando ácido clorhídrico o sulfúrico y como indicador una disolución alcohólica de una mezcla de rojo de metilo y azul de metileno (ecuación 4). Los equivalentes de ácido consumidos corresponden a los equivalentes de amoniaco destilados.

H2BO3 + H → H3BO3

IV. PARTE EXPERIMENTAL

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO

Materiales:

Balón kjeldhl

Beacker de 250 mL

Probeta

Pipeta 5mL

Bombilla

Equipos:

Equipo de destilación

Equipo de titulación

Reactivos:

CuSO4 o CuSO4.5H2O

K2SO4 o Na2SO4

H2SO4

HCl 0,1N

NaOH 40% , NaOH 0,1N

Indicador tashiro (1 gota azul de metileno + 1 gota rojo de metilo)

Muestra:

Carne seca (charqui)

PROCEDIMIENTO

Pesar 0.1g de muestra seca y colocarla en un balón de kjeldahl

Adicionar 0,1 g de CuSO4.5H2O + 1,5g K2SO4

Añadir 10mL de H2SO4 cc y llevarlo a una campana extractora para la digestión

La muestra va a adquirir un color verde esmeralda una vez que suceda esto se deja enfriar y se transfiere por lavados sucesivos

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