Determinación del tipo de inhibición y constantes asociadas a la inhibición de reacciones catalizadas por enzimas
Enviado por Carito Olovache • 28 de Junio de 2022 • Exámen • 542 Palabras (3 Páginas) • 42 Visitas
Guía No. 6
Modalidad: Presencial, 3h
Tema: Determinación del tipo de inhibición y constantes asociadas a la inhibición de reacciones catalizadas por enzimas.
Objetivo:
Determinar el modo de inhibición y las constantes cinéticas de una reacción enzimática en ausencia y presencia de inhibidor.
Instrucciones:
- Lea la hoja guía antes de presentarse a la práctica.
- De ser posible, trabaje individualmente. Caso contrario trabaje en parejas.
- Su informe de la guía deberá presentarse individualmente de acuerdo como se indica en el procedimiento de la guía.
Uno de los primeros pasos en el estudio y caracterización de enzimas es la determinación de los parámetros cinéticos de la reacción que catalizan. El estudio de la cinética y de la dinámica química de una enzima permite explicar los detalles de su mecanismo catalítico, su papel en el metabolismo, cómo es controlada su actividad en la célula. Estos estudios sirven como base para comprender como la actividad de una enzima puede ser inhibida o potenciada, lo cual es de gran importancia para la generación de compuestos con aplicaciones en diferentes industrias como la farmacéutica, agrícola, pecuaria, entre otras. En este sentido, el estudio del papel que juegan ciertos inhibidores y como alteran las constantes cinéticas de una reacción catalizada por una enzima son de gran relevancia para la identificación de moléculas con gran capacidad bioactiva.
Listado de equipos, materiales y recursos:
Papel milimetrado
Calculadora
Computador
Actividades por desarrollar:
Problema:
Experimentalmente se han obtenido los valores de Vo, medidos a diferentes concentraciones de sustrato, para una reacción catalizada por una enzima en ausencia y presencia de inhibidor (tabla 1). La concentración de la enzima fue 1.2 x 10-4 mmol/L, mientras que la concentración para los inhibidores en cada una de las mediciones fue [I1] = 0.046 mmol/L e [I2] = 0.120 mmol/L.
Tabla 1. Vo para una reacción catalizada por una enzima en presencia y ausencia de inhibidor.
[S] (mmol/L) | Experimento 1 Vo sin inhibidor (mmol/L.min) | Experimento 2 Vo con inhibidor 1 (mmol/L.min) | Experimento 3 Vo con inhibidor 2 (mmol/L.min) |
0.710 | 0.200 | 0.180 | 0.100 |
0.400 | 0.180 | 0.150 | 0.090 |
0.310 | 0.160 | 0.110 | 0.085 |
0.098 | 0.120 | 0.070 | 0.076 |
0.066 | 0.100 | 0.050 | 0.070 |
0.040 | 0.070 | 0.040 | 0.050 |
Determinar:
- Utilizando los datos del experimento 1, determine Km, Vmax, kcat para la reacción catalizada por una enzima.
METODO LINEWEAVER – BURK
[S] (mmol/L) | Experimento 1 Vo sin inhibidor (mmol/L.min) |
0.710 | 0.200 |
0.400 | 0.180 |
0.310 | 0.160 |
0.098 | 0.120 |
0.066 | 0.100 |
0.040 | 0.070 |
[pic 1]
1/S | 1/Vo | |
1,4085 | 5,0000 | |
2,5000 | 5,5556 | |
3,2258 | 6,2500 | |
10,2041 | 8,3333 | |
15,1515 | 10,0000 | |
25,0000 | 14,2857 |
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