Diversidad De Protozoos Dulceacuícolas

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Ciencias, Biología

Biología de Protistas y Algas

Práctica 3: Diversidad de protozoos dulceacuícolas

INTRODUCCION:

Los protozoos, considerados durante mucho tiempo como un phylum del reino animal, presentan, a pesar de su unicelularidad, una gran variabilidad y complejidad de sus estructuras en los diferentes grupos que comprenden. Ello y su indudable origen polifiletico ha inducido a la mayoría de los protozoologos a darles el rango de subreino, dentro del reino de protistas. Podrían definirse, por lo tanto como Protistas de organización eucariotica y de naturaleza animal, lo primero por el hecho de tener su material genético agrupado en unidades estructurales y aisladas en un núcleo definido, lo segundo por su nutrición. El tamaño de estos organismos varia mucho, por ejemplo los parásitos miden tan solo 2-4 mm, su forma es variable, en gran parte dependiendo del tipo de envoltura o cubierta celular que protege y limita su cuerpo. En los que esta cubierta esta reducida a una simple membrana trilaminar lipidoproteica, la membrana celular básica, su forma es variable de un momento a otro y podría hablarse de la misma como cambiante o ameboide.

En otros, en los provistos de estructuras asociadas a esta cubierta básica que le confieren una cierta rigidez, la forma es constante y definida, sujeta tan solo a ligeras variaciones dada la elasticidad de su envoltura. Forma y tamaño son características, dentro de ciertos límites para la mayoría de especies que parasitan al hombre y son tenidas en cuenta, junto a algunas de sus estructuras citoplasmáticas, para su caracterización. Por otra parte un gran número de los protozoos parásitos se caracterizan por el hecho de que durante su ciclo vital pueden ofrecer un aspecto cambiante, tanto en su forma como en sus dimensiones, cambios que van asociados a dos tipos de causas que los condicionan. El polimorfismo, asociado a los diferentes estadios evolutivos que pueden aparecer en su ciclo vital, en el que estos pueden presentar formas trofozoicas asexuales y activas, formas quísticas o de reposo, formas sexuales o gameticas, y estadios multiplicativos asexuales (esquizontes) o subsiguiente a un proceso sexual (esporonte); debido a esto , polimorfismo también se conoce como polimofismo evolutivo. El pleomorfismo, que se asocia a las variaciones de forma que puedan presentar las formas de uno de estos estadios evolutivos, a veces considerables cuando un trofozoito, por ejemplo, se halla dentro de hospederos distintos (Gallego Bernguer Jaime 2006)

Con el fin de observar algunos orgánulos citoplasmáticos, en la muestra se le agrega una gota de colorante vital, esta aplicación no requiere de fijación, aclaramiento ni montaje, son varios los colorantes vitales que se utilizan por ejemplo:

(Cilva Garcia Carmen, Garcia Bermejo José, 1ra edición, 2004)

COLORANTE ESTRUCTURA QUE TIÑE

Azul de crecil brillante Aparato parabasal

Azul de metileno Nucleo, granulos citoplasmaticos

Azul de toluidina cc Cilios, flagelos

Lugol Almidon, cilios, flagelos (quistes en vivo)

Nigrosina Citoplasma, membranas, tricocistos

Rojo congo Vacuolas digestivas

Rojo neutro Vacuolas contráctiles

Verde de metilo Nucleos, mitocondrias, cromosomas

Verde jano Mitocondrias

Verde rapido Citoplasma, nucleo

Violeta de metilo Citoplasma,cilios, flagelos

(la tabla la obtuvimos de el “manual de prácticas de laboratorio de protozoos de Aladro Lubel Antonieta )

OBJETIVOS

Conocer las diferentes técnicas para lograr una observación fácil, completa y eficaz, abarcando la mayor cantidad de características en el menor tiempo. Ayudándonos a hacer observaciones más detenidas y claras con ayuda de colorantes y retardadores de movimiento.

A partir de esto, reconocer las principales características de cada protozoo e irnos familiarizando con ellos (como organelos, comportamiento, estructura 3D, tamaño) para después poder reconocer la especie a la que pertenecen.

Aprender a tomar una referencia de la medida de los protozoos sin necesidad de escala.

Lograr hacer un correcto registro iconográfico, fotográfico y de video de los protozoos para usarlo como herramienta para futuros trabajos e investigaciones

En base a estas técnicas, comparar los protozoos encontrados en la cantera con los hallados en la segunda muestra que se tomó de otro cuerpo acuático dulce (en nuestro caso el lago de Guayamilpas), no sólo en especies sino también las características principales, basándonos en las diferencias físicas de los medios en donde se tomaron las muestras, la profundidad y algunas otras variantes.

METODOLOGÍA

Dividió el equipo y algunos tomaron muestra de la cantera y otros del lago de Guayamilpas, para ambos equipos se siguió la misma metodología.

Se tomó una gota de la muestra a diferentes profundidades, tratando te tomarlas cerca de materia orgánica si es que existe, se coloca en un portaobjetos limpio y con cuidado se coloca en cubreobjetos. Se observa al microscopio comenzando con el objetivo 10x pasando en orden a los siguientes objetivos al localizar algo de interés. Si los microorganismos están muy activos se puede poner un poco de vaselina en las esquinas del cubreobjetos, otra manera fue quitando el exceso de agua con una toallita para que se haga presión.

Se calculó el tamaño aproximado del microorganismo poniendo el objetivo 10x y estimando que el diámetro es de 1600µ, según el tamaño del protozoo este tamaño se dividió en fracciones.

Después de esta observación se hicieron esquemas con las principales características de los protozoos, sin olvidar anotar un aproximamiento de su tamaño.

Después de esto se agregaron colorantes como aúl y verde de metileno, cristal violeta y safranina, colocando una gota pequeña al extremo de nuestra preparación fresca, justo a lado del cubreobjetos. Esperamos a que el colorante se extienda, limpiamos exceso y se repitieron los pasos

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