EL LABORATORIO DE EMBRIOLOGÍA

EL LABORATORIO DE EMBRIOLOGÍA

INTRODUCCIÓN

En el laboratorio de embriología se llevan a cabo las técnicas avanzadas dentro del marco de las Técnicas de Reproducción Asistida (TRA). La fecundación in vitro (FIV) es un tratamiento ampliamente utilizado dentro del grupo de las TRA. Consiste básicamente en la fecundación del ovocito por el espermatozoide en condiciones de cultivo in vitro, previa obtención y preparación de gametos, y posterior transferencia de los embriones obtenidos a la cavidad uterina. Los embriones que no son transferidos se criopreservan para su uso en posteriores ciclos.

Para obtener el máximo rendimiento con la FIV, es indispensable disponer del mayor número de ovocitos para inseminar, ya que así dispondremos del mayor número de embriones a seleccionar. Para ello se somete a la mujer a un tratamiento de Estimulación Ovárica Controlada que consigue un Desarrollo Folicular Múltiple (DFM), ya descrito en temas anteriores.

El proceso de la fecundación in vitro que se lleva a cabo en el laboratorio de embriología consiste en una serie de procedimientos que precisan de requisitos específicos y condiciones de equipamiento que vienen recogidos en el RD 413/1996, de 1 de Marzo. Recientemente se ha publicado una guía de buenas prácticas: “Revised guidelines for good practice in IVF laboratorios (2015)”, Human Reproduction, 2015, en donde se revisa todo el equipamiento necesario. En este tema desarrollaremos los distintos procedimientos que se llevan a cabo en el laboratorio de embriología.

1. PUNCIÓN OVÁRICA, PROCESAMIENTO DEL LÍQUIDO FOLICULAR Y RECOGIDA DE LOS CÚMULOS OVOCITARIOS.

La punción ovárica se realiza en quirófano, a ser posible contiguo al laboratorio de FIV. Consiste en la punción de los folículos ováricos mediante una aguja de punción folicular que va acoplada a una sonda vaginal ecoguiada. La aguja va conectada a un sistema de aspiración, y a su vez a un tubo estéril donde se recoge el líquido folicular. A los tubos se les añade heparina previo a la recogida del líquido para evitar la formación de coágulos cuando el proceso es muy hemorrágico, también se les puede añadir medio de cultivo para lavado de ovocitos. Una vez se han recogido todos los tubos se llevan a la cabina de flujo laminar calefactada donde se buscan los ovocitos mediante inspección directa en estereomicroscopio. Es importante mantener la temperatura de los tubos a 37ºC durante todo el proceso de punción, por ello se debe o bien buscar los ovocitos inmediatamente tras la aspiración o bien mantener los tubos en termobloques calefactados hasta que se termine la punción.

Los materiales necesarios son: tubos para punción, placas de petri para recogida, placas de petri para lavado, medio de cultivo para lavado de ovocitos, pipetas Pasteur de cristal flameadas, jeringas insulina y agujas para deshacer coágulos, estereomicroscopio y cabina de flujo laminar horizontal calefactada y mechero flamear las pipetas.

Una vez tenemos los tubos dentro de la cabina calefactada a 37ºC vamos uno a uno, vertiéndolos en placas de petri para la recogida previamente calentadas e inspeccionamos primero macroscópicamente, visualizamos el cúmulo ovocitario (ovocito envuelto por las células de la granulosa) con un aspecto de moco transparente o cúmulo refringente característico que luego se confirma bajo inspección en el estereomicroscopio o lupa (Figura 1). Se debe inspeccionar toda la placa y sobre todo los bordes de la misma puesto que los cúmulos tienden a irse a estos. Una vez localizados el/los ovocitos, se recogen con la pipeta Pasteur y se depositan en la placa de lavado con medio de cultivo. Una vez están todos los ovocitos en la placa de lavado se pasan a otra placa con medio de cultivo para FIV previamente acondicionada (mínimo de 2 horas en el incubador). Los ovocitos ya recuperados se mantendrán dentro del incubador (37º C y 6 % CO2) hasta el momento de la inseminación.

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Figura 1: Complejo cúmulo-corona-ovocito.

2. INSEMINACIÓN DE LOS OVOCITOS (DÍA+0)

Llegados a éste punto, tenemos que distinguir entre las los técnicas disponibles para realizar la inseminación de los ovocitos y conseguir la fecundación de estos por los espermatozoides, con el fin de llevarlos a cultivo in vitro hasta estadíos tempranos de desarrollo embrionario. Disponemos de Fecundación in vitro convencional (FIV) y Microinyección del espermatozoide dentro del ovocito (ICSI) (Figura 2). En función de las indicaciones de la pareja en tratamiento de reproducción asistida, se aplicará una u otra.

• Indicaciones de la FIV: se aplica a parejas con problemas de infertilidad femenina (enfermedad tubárica, endometriosis) y con parámetros seminales normales o moderadamente alterados (oligo, asteno, teratozoospermia moderadas, presencia de anticuerpo antiespermatozoides). Tras fallos de Inseminación Artificial (IA) y en infertilidad no explicada.
• Indicaciones de la ICSI: se emplea en parejas con problemas de infertilidad masculina severa, con parámetros seminales muy alterados (oligo, asteno, teratozoospermia severa).

Tras fallos repetidos de IA , tras fallo de fecundación en FIV, en Azoospermias obstructivas o secretoras (se obtienen los espermatozoides de aspiración de epidídimo: o de biopsia de testículo), en sémenes valiosos y en Diagnóstico Genético Preimplantacional (DGP)

La FIV consiste en poner en contacto durante varias horas y en una placa de cultivo los cúmulos ovocitarios (CCO) recuperados tras la punción con los espermatozoides, previamente capacitados, de manera que serán los propios espermatozoides (SPZs) los encargados de fecundar por si solos a los ovocitos. Para la inseminación de los ovocitos con los espermatozoides previamente capacitados tendremos en cuenta los siguientes aspectos:

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