El proceso de separación de las disputas

Procedimiento

1. Pesar 150g de la muestra y ponerla a secar en una mufla por alrededor de 24hrs.

2. Colocar 100 g de la muestra de suelo en un vaso de precipitado y suspender en, al menos, 500 ml de agua.

3. Agitar hasta que las esporas queden suspendidas y dejar reposar 30 segundos.

4. Pasar la suspensión repetidamente a través de dos tamices anidados con abertura de malla de 710 µm y 45 µm. Comentarios: en el paso 3, se pueden anidar otros tamices entre los dos recomendados. Esto separa a las esporas por tamaños pero incrementa la cantidad de trabajo ya que el material retenido en cada tamiz debe centrifugarse por separado.

5. Coloque el material retenido en el tamiz de 710 µm en una caja de Petri grande y observe bajo el microscopio estereoscópico para observar esporas grandes.

6. Coloque el material retenido en el tamiz de 45 µm en una vaso de precipitados con una pequeña cantidad de agua; después transfiera este material a un tubo de centrífuga que contenga un gradiente de sacarosa de 20–60%.

7. Centrifugue a 2,000 rpm durante 60 segundos.

8. Vacíe el sobrenadante en el tamiz de 45 µm y lave con agua corriente para quitar el exceso de sacarosa.

9. Transferir las esporas y el material retenido en el tamiz 45 µm a una caja de Petri y bajo el microscopio colecte las esporas en un vidrio de reloj limpio. Los tamices recomendados (con mallas de 710 µm y 45 µm) son adecuados para recuperar la mayoría de especies, ya que el tamaño de las esporas para la mayoría de las especies está en un intervalo de 40 a 600 µm. Sin embargo, si hay demasiados pedazos de raíz y otros desechos, es preferible vaciar la suspensión de suelo a través de un tamiz de 1 mm antes de pasar por el tamiz de 710 µm. La solución de sacarosa se hace con azúcar comercial, comprada en el supermercado. Para preparar el gradiente de la sacarosa, agregue 15 ml de la solución de sacarosa al 20% en un tubo de centrífuga de 50 ml y después, en el fondo, agregue otros 15 ml de la solución al 60% . Las esporas pueden separarse de los residuos orgánicos y recogerse de la caja de Petri usando unas pinzas finas o una pipeta Pasteur adelgazada en la punta. En este momento, las esporas se pueden separar por morfotipos de acuerdo con su color y tamaño y si las esporas están en buen estado se pueden identificar hasta género y especie. Los suelos con alto contenido de arcilla pueden obstruir los tamices; se puede agregar una pequeña cantidad de pirofosfato de sodio a 0.1M (Fogel y Hunt, 1979) para dispersar las partículas de arcilla y liberar las aberturas del tamiz.

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