Espectofotometria Y Cromatografia

INTRODUCCION.

La espectroscopia o espectrofotometría ultravioleta-visible se usa rutinariamente en química analítica para la determinación cuantitativa de diferentes analitos, tales como iones de metales de transición, compuestos orgánicos altamente conjugados y macromoléculas biológicas. Los análisis espectroscópicos normalmente se llevan a cabo en solución, pero también pueden estudiarse sólidos usando la esfera de integración (Perez, s.f.).

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos da como resultado una retención diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separación efectiva en función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla (2015).

ESPECTROFOTOMETRIA EN LA REGION VISIBLE.

La espectrofotometría en la región visible se basa en la absorción de radiación por parte del analito que está siendo objeto de nuestro estudio, esta absorción de radiación ocurre por la excitación electrónica que ocurre en el analito en donde un electrón pasa de un estado basal a un estado excitado, y luego regresa a su estado inicial liberando el exceso de energía en forma de calor.

Este haz de radiación se debe emitir con una determinada longitud de onda que esta comprendida entre 190 y 800 nm, en la cual las disoluciones absorben un máximo de energía, cuando un haz de radiación Ultravioleta-Visible atraviesa una disolución que contiene el analito absorbente, la intensidad incidente del haz (io) es atenuada hasta I. Esta fracción de radiación que ha logrado traspasar la muestra es denominada transmitancia (T) (T = I/io). Por aspectos prácticos, se utilizará la absorbancia (A) en lugar de la transmitancia (A = - log T), por estar relacionada linealmente con la concentración de la especie absorbente según la Ley de Beer-Lambert. A =E*l*C (E: coeficiente de absortividad molar, l: Longitud del paso óptico que contiene la muestra, c: concentración de la especie absorbente).

El espectrofotómetro UV-Visible mide la intensidad de luz que pasa a través de una muestra (I), y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a través de la muestra (Io) para relacionarlas siguiendo la ley de Beer-Lamber y obtener la absorbancia que se muestra en la pantalla del espectrofotómetro.

Para realizar una curva de calibración en primer lugar debemos determinar la longitud de onda a la cual la absorción de luz es máxima por parte del analito pues el error de medición es mínimo y la sensibilidad máxima. En la representación de absorbancia (A) en función de longitud de onda (λ) en un solo valor de concentración del analito se presentan ondulaciones con máximos y mínimos, se elige la longitud de onda en donde la absorción es máxima.

Siguiendo la ley de Beer-Lamber se realiza la curva de calibración; absorbancia (A) en función de concentración (C) tomando distintos valores de concentración de analito en la disolución, y se mide la absorbancia a la longitud de onda elegida. Si la sustancia sigue la ley de Beer la relación es una línea recta, que pasa por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan desviaciones debidas a diversos factores. Esta recta sigue la ecuación general de la recta “Y=mX+b” (Y: Absorbancia, m: pendiente de la recta, X: Concentración de la especie absorbente, b: factor de corrección.) así se puede hacer una interpolación o extrapolación del valor de la concentración del analito con el valor de la absorbancia obtenida por medio del espectrofotómetro.

CROMATOGRAFIA DE GASES.

La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas que están

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