CROMATOGRAFIA

INTRODUCCIÓN

Las primeras separaciones, con resultados positivos, por medio de métodos cromatográficos fueron llevadas a cabo por Tswett en el año 1.906; este botánico ruso consiguió separar algunos pigmentos coloreados de hojas de plantas utilizando una columna de alúmina

El desarrollo total de estas técnicas se produjo, no obstante, a partir del año 1931, en que Kuhn y Lederer comenzaron a utilizarlas de manera sistemática. La cromatografía de líquidos (CL) sufrió un relativo estancamiento a partir del año 1952 en que Martin y James impulsaron el desarrollo de la cromatografía de gases (CG), que acaparó los esfuerzos teóricos encaminados al conocimiento profundo de la cromatografía. No obstante, las limitaciones de la CG en cuanto al tipo de muestras analizables (volátiles o derivados volátiles de las mismas), originó, en la segunda década de los sesenta, una vuelta a considerar la CL cuyas limitaciones, en este sentido, se reducen a la posibilidad de disolver la muestra, lo que le confiere un rango mucho más amplio

de aplicación. Este hecho, junto con la aparición de fases estacionarias con diámetros de partícula mucho menores que los utilizados hasta entonces (3 a 25 :m), que permiten obtener columnas de mayor eficacia, llevó a una utilización cada vez más extensa de este tipo de cromatografía

La experiencia acumulada en el desarrollo de la CG permitió también aplicar nuevos puntos de vista a la CL, para la que pronto se diseñaron sistemas de inyección, circulación del eluyente y detección, de eficacia comparable a la de los utilizados en CG, dando lugar a la moderna técnica de cromatografía líquida de alta eficacia (CLAE).

EL PROCESO CROMATOGRÁFICO

La cromatografía líquida de alta eficacia se encuadra dentro de la cromatografía de elución. En ésta, un líquido (fase móvil) circula en íntimo contacto con un sólido u otro líquido inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla de substancias (analitos) en la corriente de fase móvil, cada analito avanzará a lo largo del sistema con una velocidad diferente que dependerá de su afinidad por cada una de las fases. Esto supone que después de terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las substancias introducidas en el sistema eluirá con un tiempo diferente, es decir, estarán separadas.

Clasificación de la cromatografía liquida

- Cromatografía de adsorción (líquido-sólido).

La fase estacionaria es un adsorbente y la separación se basa en repetidas etapas de adsorción-desorción.

- Cromatografía de intercambio iónico.

Este tipo de cromatografía se da cuando la fase estacionaria presenta en su

superficie grupos ionizados capaces de retener selectivamente a iones de signo contrario que circulan en la fase móvil

- Cromatografía de exclusión molecular.

La fase estacionaria, en este caso, es un material poroso de tamaño de poro controlado, que permite la entrada de ciertas moléculas de manera selectiva,

dejando fuera otras de mayor tamaño.

INSTRUMENTACIÓN

Los componentes básicos de un cromatógrafo de líquidos son:

Dispositivo de suministro de eluyentes (bomba y dispositivo de mezclado de eluyentes).

-Dispositivo de inyección

-Conducciones y conexiones

-Detector y registrador

-Columna.

Sistema de suministro de fase móvil

La bomba

La misión de la bomba es la de suministrar un caudal constante y libre de pulsos de la fase

Un sistema de bombeo ideal debe cumplir las siguientes caracteristicas

Estar construido con materiales químicamente inertes frente a la fase móvil

- Ser capaz de trabajar a presiones elevadas

- Proporcionar un flujo libre de pulsaciones por que afectan al ruido de fondo del detector

- Suministrar flujos adecuados para los diferentes tipos de columnas

- El caudal que suministran debe ser constante a lo largo del tiempo

Tipos de bombas

Bombas neumáticas: Bomba amplificadoras de aire. Bomba de desplazamiento directo.

Bombas de motor eléctrico. (A) Bomba de jeringa. (B) Bomba alternante

Sistemas de mezcla de fase móvil

En cromatografía de líquidos, es posible trabajar en dos modalidades; isocrático, cuando la fase móvil mantiene la misma composición durante la elución, y en gradiente, cuando la composición de la fase móvil cambia según una función dependiente del tiempo.

Para trabajar en la modalidad de gradiente, es necesario que el equipo cromatográfico tenga un dispositivo capaz de realizar mezclas de disolventes con un control preciso y reproducible. como mezclado a alta presión y mezclado a baja presión

Mezclado a alta presión

Este sistema de mezclado utiliza una bomba para cada uno de los disolventes que se van a mezclar, estando la salida de cada bomba conectada a una conexión en "T" o a una pequeña cámara de mezcla. La denominación de mezcla en alta presión es debida a que la mezcla se realiza una vez que los disolventes han pasado la bomba y, por lo tanto, han adquirido la presión

de trabajo.

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