Evaluacion de al actividad antimicrobiana y cuantifiacion de compuestos fenolicos de plantas Pizacua y Ciruelillo

RESUMEN[pic 2]

El presente trabajo de investigación consiste en el análisis cuantitativo de las propiedades de plantas llamadas “Pizacua” y “Ciruelillo” consideradas para los pobladores de la comunidad de las cruces como benéficas.

El problema de la investigación era el análisis de su actividad antimicrobiana así como la cuantificación de los compuestos fenólicos que contenían. Dicho análisis ayudaría en gran medida a determinar si realmente radica alguna propiedad medicinal en ellas.

Se llevó a cabo con una metodología ya preestablecida, recabando información de los pobladores y revisión de literatura para posteriormente pasar a las pruebas fitoquímicas. Se analizaron variables como la absorbancia y la coloración.

Todo lo anterior ayudo a la formulación de conclusiones de tal manera que sea una base confiable para investigaciones posteriores referentes a estas plantas.

INTRODUCCIÓN

El uso de compuestos antimicrobianos naturales ha ganado mucho la atención de los consumidores y de la industria. Esto es debido a dos principales motivos. Primero, el mal manejo y uso de antibióticos ha resultado en el aumento de un grupo de microorganismos que no solo son resistentes a estos antibióticos si no ah varios procesos y métodos de preservación. Por otra parte, el incremento de conciencia en los consumidores acerca del potencial impacto negativo de preservativos sintéticos en la salud contra los beneficios de aditivos naturales ha generado interés entre los investigadores en el desarrollo y uso de estos productos naturales. Esto ha incitado a la industria en la búsqueda de conservadores naturales que puede mejorar la seguridad y calidad.

Estudios etnofarmacologicos han demostrado que algunas especies de plantas son usadas de manera  empírica por la población o comunidad para combatir enfermedades. Pero que de cualquier manera es necesario corroborar        las        propiedades cuantitativas de estas especies de plantas.

Una de estas plantas y frutillos son las llamadas “Pizacua” y “Ciruelillo” consideradas como medicinales por los pobladores de la comunidad de las cruces del estado de Guanajuato.

OBJETIVOS

• Obtener extractos del fruto de la pizacua y ciruelillo.
• Evaluar la actividad antimicrobiana mediante el método un biográfico en placa.
• Evaluar el contenido de fenoles totales por el método de Folin- Ciocalteu.
• Evaluar el contenido de taninos condensados mediante el ensayo de vainillina.

MATERIALES Y MÉTODOS

1. Recolecta.

La recolecta de Ciruelillo (Celtis pallida) y de Pizacua se realizo en la Comunidad de Las Cruces está situado en el Municipio de Salvatierra (en el Estado de Guanajuato). Las coordenadas geográficas 200º 55' 5''

latitud Norte, 100º 58' 38'' longitud Oeste, con una altura promedio sobre el nivel del mar de 2160 metros

1. Extracción, concentración y filtrado de muestras.

Al fruto se les retira la semilla y la pulpa, los cuales se almacenan en distintos contenedores. Al material vegetal se le realiza las siguientes extracciones:  PULPA.  Extracción con:

1) H2O/H2SO4, 2) Metanol, y 3) Hexano. Se dejan reposar por un lapso de una semana. SEMILLA: 1) H2O/HCl, 2) Cloroformo,    3)    Hexano.    Se   dejan

reposar por un lapso de una semana, Todos los extractos se filtran. Una vez filtradas se concentran.[pic 3]

1. Pruebas fitoquímicas y placas de cromatografías de capa fina.

Pruebas fitoquímicas. A los extractos se le realiza un barrido fitoquímico, en el cual se incluyen las siguientes pruebas: A) Test Cloruro Férrico: Detección de taninos y fenoles; B) Test Salkowski: Detección de terpenos ; C) Test Saponificación: Detección de Saponinas; D) Test Wagner: Alcaloides

; E) Test Keller-Kiliani: Detección de Deoxiazucar cardenolina, glucósidos cardiacos; F) Test Vainillina: Detección de Taninos condensables; G) Test Reactivo alcalino: Detección de Flavonoides; I) Test reactivo de Meyer: Detección de Alcaloides. Estos se realizaron en placas de 96 pozos de fondo curvo aplicando 50 μL de extracto.

Cromatografías de capa fina. A cada extracto se le realizo una cromatografía de capa fina teniendo como fase móvil una solución de Ácido acético + Acetonitrilo + Agua. Una vez secas las placas se revisan en una cámara de rayos UV. Las placas se  revelan por los siguientes métodos: 1) Vainillina, 2)

Folin 3) Sulfato Sérico, 4) Iodo.

1. Cuantificación de fenoles.

Para cuantificar los fenoles se Utilizo el procedimiento descrito por Khoo et al. (2011). El cual consiste en mezclar 50 μL de extracto + 50 μL de reactivo de Folin-Ciocalteu + 100 μL de una solución 0.3M. Se deja en reposo 3 min y se lee la placa a 750 nm. La curva de calibración se realiza utilizando acido gálico como patrón de referencia.

Se utiliza como blancos (NaOH + Folin) y como calibrador (Agua destilada).

1. Actividad Antimicrobiana. Método Bioautográfico para la detección de actividad antimicrobiana.

El método consiste en colocar las muestras a evaluar en placas TLC, seleccionar la fase móvil que de mejor

separación, posteriormente a esta placa se le coloca una capa de agar y se inocula la cepa a evaluar y se  incuba por 24 h a 37 ºC. Posteriormente se agrega 1 mL de cloruro de trifeniltetrazolio (CTT 10 mg/ml) dejando incubar durante 30 min.

RESULTADOS

Se obtuvieron 6 extractos (3 de semilla y 3 de pulpa) de ciruelillo. En relación a la pizacua no se pudo recolectar fruto, esto debido a las condiciones climatológicas que ocasiono que el periodo de floración fuera retrasado.

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