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Extracción del ADN:


Enviado por   •  18 de Febrero de 2014  •  473 Palabras (2 Páginas)  •  264 Visitas

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Extracción del ADN:

1. En un cristalizador prepara un baño de agua y hielo. Pon los 20 mL del etanol frío en un vaso de precipitados de 100 mL y colócalos en el baño de hielo.

2. Prepara la disolución de extracción de ADN: disuelve 2 g de sal en 90 mL de agua en un vaso de precipitados de 250 mL. Luego agrega 10 mL del detergente líquido y agita (¡muy suavemente!) con el agitador.

3. Pela el kiwi sobre el papel encerado y córtalo en pedazos regulares.

4. Usa la balanza para pesar 30 g de pedazos de kiwi, luego aplástalos en el mortero hasta tener un puré fino.

5. Coloca el kiwi en un vaso de precipitados de 100 mL.

6. Vierte toda la disolución de extracción de ADN (paso 2) sobre el puré de fruta.

7. Prepara un baño de agua caliente, y controla la temperatura a 60ºC. Revisa la temperatura con el termómetro y ajusta con agua caliente la temperatura cada 5 minutos.

8. Coloca el vaso de precipitados con la fruta y la disolución en el baño de agua caliente. Anota la hora de inicio.

9. Deja que el contenido del vaso incube en el baño de agua caliente por 10 a 15 minutos. Agita la disolución ocasionalmente para distribuir el calor. La temperatura del baño no debe bajar de 50ºC en ningún momento durante el período de incubación.

10. Después de 10 a 15 minutos transcurridos, transfiere el vaso que contiene la fruta al baño de hielo. Déjalo reposar allí por 5 minutos, agitando ocasionalmente a medida que se enfría.

11. Mientras se enfría la mezcla de extracción, monta el dispositivo de filtración. Este consiste del embudo que se coloca sobre un matraz Erlenmeyer de 250 mL, con el papel filtro doblado y humedecido.

12. Coloca la mezcla de extracción enfriada en el embudo. Permite que el líquido se filtre por unos 5 minutos.

13. Agrega unos 5 mL del filtrado en un tubo de ensayo.

Precipitación del ADN

1. Con mucho cuidado, deja escurrir por las paredes del tubo 10 mL de etanol frío (lo más frío que se pueda tener) sobre el filtrado. También puede agregarse el alcohol por medio de un gotero, dejando resbalar las gotas con el gotero inclinado.

2. Coloca el tubo de ensayo en la gradilla. Observa lo que sucede en el tubo de ensayo en la interfase entre el alcohol y el filtrado. Anota tus observaciones.

3. Permite que la disolución repose por dos minutos, sin moverla. Se formará un precipitado blanco en la interfase con el alcohol. Este es el ADN, y aparece como una sustancia resbalosa, como una especie de mucosa blanca.

4. Si lo deseas, puedes recoger el ADN, enrollándolo en la asa

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