INFORME LABORATORIO N°1 “APRENDIENDO A USAR EL MICROSCOPIO Y MICROPIPETAS”

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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CHILE FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR BIOLOGÍA DE LA CÉLULA BIO-141C

INFORME LABORATORIO N°1

“APRENDIENDO A USAR EL MICROSCOPIO Y MICROPIPETAS”

Alumnas:

María Aguilera

Carolina Ahumada

Elisa Becerra

Sección:

1A

Profesor:

Dr. Enrique Brandan

Fecha de Entrega:

21 de Marzo del 2017

INTRODUCCIÓN

Desde que existe la humanidad, la creación y uso de los avances tecnológicos para cada época han sido fundamentales para comprender y analizar diversos tópicos de la vida.

Cuando se creó el primer microscopio en 1608, fabricado por Zacharias Jansen, éste estaba compuesto por dos lentes convergentes, el cual más tarde fue utilizado por Robert Hooke en 1665 para estudiar cortes de corcho y describir las pequeñas celdas a las que llamó “células”. Este microscopio fue empleado por diversos científicos renombrados, los cuales lo utilizaron para observar variadas estructuras, sin embargo, estaban limitados a conocer sólo su forma pero no su función, debido a su escasa capacidad de aumento y resolución.

Con los años la herramienta conocida como microscopio fue evolucionando hasta convertirse en el principal instrumento de estudio en muchos ámbitos de la ciencia, debido a los avances tenemos a nuestra disposición una gran variedad de microscopios y otros elementos como las micropipetas que a su vez han ido perfeccionándose para satisfacer las múltiples necesidades que pueden surgir a la hora del estudio y la investigación, por ejemplo para el trabajo práctico realizado el dia 7 de marzo del presente año, el artefacto empleado fue el que se conoce como microscopio óptico o de luz, el cual fue clave, junto con las micropipetas P1000 y P200 para desarrollar los objetivos requeridos en la actividad.

OBJETIVOS

El objetivo general se basa en comprender los aspectos necesarios para poder utilizar el microscopio de luz y las micropipetas. Los objetivos específicos, consisten en analizar la estructura y mecanismo de funcionamiento del microscopio de luz a través de la visualización de diversas muestras con y sin tinción y en adquirir destreza en la utilización de micropipetas para la medición de absorbancia de las soluciones con rojo fenol mediante el espectrofotómetro.

METODOLOGÍA

Para resolver la primera parte del trabajo práctico se utilizó un microscopio marca Olympus y se analizó las 3 muestras, las cuales consistían en tres letras del abecedario, en los objetivos 10x, 20x y 40x. Para cambiar de objetivo se giró el revólver en dirección de las manecillas del reloj. Para ajustar el portaobjetos en el objetivo se manipuló las perillas coaxiales de movimiento x-y de la platina, y para obtener la resolución deseada de la muestra se manipuló las perillas coaxiales de enfoque macro y micrométrico. En la segunda parte, se realizó un frotis de mucosa oral, el cual se observó en primera instancia sin tinción y posteriormente para dar contraste, la muestra se tiñó con azul de metileno y se cubrió con un cubreobjetos.

Para resolver la segunda parte del trabajo práctico se utilizó dos tipos de micropipetas, P1000 y P200, con estas se midió y preparó 6 soluciones distintas en tubos eppendorf. La primera solución constó de 1000µL de H2Od, la segunda solución de 900µL de H2Od y 100µL de rojo fenol, en la cual se ocupó la P200 para verter el rojo fenol, la tercera solución constó de 700µL de H2Od y 300µL de rojo fenol, la cuarta solución de 500µL de H2Od y rojo fenol respectivamente, la quinta de 250µL de H2Od y 750µL de rojo fenol y la sexta sólo de 1000µL de rojo fenol. La mezcla de líquidos se hizo con la P1000 dentro del tubo eppendorf y luego se traspasó cada solución a una cubeta limpia, la cual se colocó en el espectrofotómetro previamente calibrado con agua destilada, el cual midió la absorbancia de cada solución a una longitud de onda de 560 nm.

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Al comienzo de la actividad se observó bajo el microscopio cada portaobjetos con su respectiva letra. Primero se utilizó el objetivo 10X con el cual fue necesario realizar una elevación de la platina con la cremallera para acercar el objeto al objetivo. Posteriormente se manipularon las perillas coaxiales para desplazar la platina y centrar el portaobjetos en el objetivo. Finalmente se accionaron los tornillos de enfoque macro y micrométrico para lograr la resolución deseada (Fig.1). A continuación se procedió a girar el revólver en dirección de las manecillas del reloj y se acomodo en el objetivo 20X, con el cual el campo visual se redujo, debido a esto, se desplazó la platina con las perillas de movimiento x-y para observar la letra en su totalidad. El aumento y la resolución mejoraron evidentemente (como se observa en la Fig.2).

Por último se observó la letra a través del objetivo 40X, con el cual el campo visual se redujo aún más pero se logró una mayor resolución respecto al objetivo 20X (Fig.3).

(Fig.1) (Fig.2) (Fig.3)

foto letra 40X.jpg foto letra 10 X.jpg foto letra 20X.jpg

Fig.1 corresponde a la letra observada con el objetivo 10X. Fig.2 corresponde a la letra observada con el objetivo 20X. Fig.3 corresponde a la letra observada con el objetivo 40X.

En la segunda parte del trabajo práctico se realizó un frotis de mucosa oral, se dispuso la muestra en un portaobjetos y luego se cubrió con un cubreobjetos para posteriormente ser observada bajo el microscopio. De la misma manera que con las letras, la muestra se examinó con tres objetivos diferentes, 10X, 20X y 40X. Al momento de observar la muestra a través del microscopio no se logró percibir ninguna estructura definida con ninguno de los objetivos, debido a la transparencia de la mucosa oral. En vista de lo mencionado, se procedió a teñir la muestra con azul de metileno, el cual delimitó instantáneamente cada una de las estructuras que componían la muestra. Se cubrió nuevamente con un cubreobjetos y se acomodo en la platina con el revólver ubicado en el objetivo 10X, éste permitió visualizar los límites y algunas burbujas de aire que había en la muestra (Fig.4) pero no se logró identificar ninguna estructura celular.

Posteriormente se giró el revólver para

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