LABORATORIO BIOLOGIA MOLECULAR

UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y BIOTECNOLOGÍA[pic 1][pic 2]

LABORATORIO BIOLOGIA MOLECULAR

1. TEMA

Enzimas de restricción

Se conoce como enzimas de restricción o endonucleasas de restricción a las enzimas que son capaces de cortar ADN en secuencias específicas. Estas enzimas normalmente se encuentran en las bacterias con el fin de defenderse de patógenos virales y han sido de gran ayuda para los investigadores, ya que han permitido realizar diferentes aplicaciones biotecnológicas como es el caso de la clonación de ADN (Buckhout et al., 2018).

El inicio de las enzimas de restricción se dio por primera vez en 1952-1953 por Luria, Human, Bertani y Weigle. Estos autores analizaron la capacidad de crecer de bacteriófagos en diferentes cepas huésped y en la vez observaron que una vez que estas cepas lograban su crecimiento los pagos continúan creciendo en esta cepa, pero ya no tenían la capacidad de crecer en otras cepas. Tiempo después Matt Meselson y Bob Yuan aislaron una enzima de restricción de Escherichia coli, este tipo de enzimas reconocen secuencias de ADN específicas y además de eso pueden escindir el ADN aleatoriamente provocando que las enzimas no sean adecuadas para su uso en el caso de reactivos de clonación. Continuando con los dos avances en 1970 Smith produjo un artículo en el cual describió una enzima, la misma que era, la enzima endonucleasa R, esta enzima era capaz

de dividir en la DN del bacteriófago T7 en fragmentos más específicos, siendo esta la primera enzima de restricción de tipo II (Roberts, 2005).

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Fuente: (Loenen et al., 2014).

Las enzimas de restricción son consideradas una herramienta primordial para realizar útiles ensayos en el área de investigación, como es en el caso de la construcción de vectores con ADN recombinante y clonación de secuencias de ADN de origen humano, virus, bacterias y diferentes microorganismos de interés. Para realizar esto se puede cortar una molécula de ADN con una enzima, y con el mismo tipo de enzima, cortar el fragmento de ADN de interés con el fin de clonarlo, este vector puede usarse con el fin de transformar células que expresen el gen de interés clonado (Montes & Rodríguez, 2016). Por otro lado, el uso de enzimas de tipo II son primordiales ya que estas, ofrecen beneficios con E. coli k12, pues sus genes y sus vectores se convirtieron en los caballos de la batalla de la biología molecular en la década de 1970 para la secuenciación del ADN, detección y sobreproducción de las enzimas (Roberts, 2005).

Por otra parte, se encuentran las endonucleasas de restricción, las cuales se usan frecuentemente en investigaciones de biología molecular para aplicaciones como ingeniería genética: tiene amplias aplicaciones biotecnológicas en la producción de antibióticos. Mapeo de ADN, secuenciación de genes, examen de polimorfismo de la población (Montes & Rodríguez, 2016).

En pocas palabras, el uso de las enzimas de restricción ha permitido grandes oportunidades para diagnosticar el contenido de secuencia del ADN además de su uso en el campo investigativo, sin el descubrimiento de estas enzimas no se hubiera podido realizar tantos avances como se lo ha hecho hasta la actualidad es por eso que su estudio es fundamental para diferentes usos prácticos en cuanto al análisis de ADN.

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