Laboratorio de Biología Molecular de la Célula

Laboratorio de Biología Molecular de la Célula I                                                      

Medios de cultivo

Los medios de cultivo son las soluciones nutritivas que se usan en el laboratorio para el cultivo de los microorganismos. En microbiología, su usan dos tipos generales de medios de cultivo: los químicamente definidos y los complejos (o no definidos). Los medios definidos se preparan añadiendo cantidades precisas de compuestos orgánicos o inorgánicos purificados a un volumen en agua destilada. Por lo tanto se sabe la composición química exacta de un medio definido. Sin embargo en muchos casos la composición exacta de un medio no es importante. Los medios complejos pueden ser entonces adecuados o incluso ventajosos por varias razones. A menudo, los medio complejos emplean hidrolizados de caseína, carne, soja, levaduras u otras sustancias muy nutritivas, pero no definidas químicamente. Tales hidrolizados están disponible comercialmente en forma de polvo y pueden ser pesados con facilidad y disueltos en agua destilada para preparar un medio. No obstante un ilimitación importante al usar un medio complejo es que no se puede controlar su composición nutritiva exacta.

Escherichia coli

Las células de Escherichia coli son ligeramente alargadas, su volumen es de ~ 1µm3, la superficie celular es de ~ 6µm3, midiendo aproximadamente 0.7 x 2.5 µm. en un miligramo de peso fresco has 109 bacterias, lo que equivale a 0.3 mg de peso seco, 0.6 µL de agua intracelular, 0.15 mg de proteína total, 30 µg de proteínas de membrana, 70 µg de RNA total, 5 µg de mRNA total y 12 µg de DNA cromosómico. En un cultivo de división activa, cada célula tiene más de un genomas, así los 12 µg de DNA corresponden a 4 000 Kb, de cuatro genomas por célula en promedio.  

Los miembros del género Escherichia son habitantes universales de los animales de sangre caliente, incluido el hombre, aunque no son, ni con mucho, los taxones dominantes en ese hábitat. Escherichia tiene una función nutricional en el intestino sintetizando vitaminas, en especial vitamina K. como anaerobio facultativo que es, probablemente también contribuye a la anaerobiosis del intestino grueso. Algunas cepas son patógenas y han sido implicadas en el desarrollo de cuadros diarreicos en niños, a veces en proporciones epidémicas.

Miniprep

Es la extracción de DNA de naturaleza plasmidica de un cultivo bacteriano, uno de los métodos más utilizados es el miniprep descrito por Matson en 12989. En este método las células se rompen con tampón STET y lisozima, tras lo cual se hace una extracción del DNA con una mezcla de fenol-cloroformo y finalmente se precipita con isopropanol, quedando así libremente de impurezas.

Vectores de clonación

Son moléculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de DNA que llevan insertados mediante técnicas de DNA recombinante. Para que sirva de vector una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el fragmento de DNA que transporta. También tiene que tener secuencias de reconocimiento que permitan la inserción del fragmento de DNA a clonar. Los vectores que transportan un fragmento insertado se denominan vectores recombinantes.

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