Laboratorio de Biología Molecular

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Alumnos—

Maryann Caro Dautt, 203894

Roxana Gabriela Samaniego Flores, 205705

Osman Said Barba Ochoa, 203731

Eduardo Soto Rodríguez, 205813

Nazario Rascón Covarrubias, 205454

Asignación—

Proyecto de identificación y supresión de genes responsables de la infección del virus de la mancha blanca (WSSV) en camarón blanco del pacífico (Litopenaeus vannamei) a través de técnicas moleculares

Fecha—

27 de septiembre del 2020

Materia—

Laboratorio de Biología Molecular

Profesor—

Alejandro Figueroa

Índice

Identificación y supresión de genes responsables de la infección del virus de la mancha blanca (WSSV) en camarón blanco del pacífico (Litopenaeus vannamei) a través de técnicas moleculares        2

Resumen:        2

Introducción        3

Objetivo        4

Marco teórico        6

Antecedentes        6

Referencias        16

Identificación y supresión de genes responsables de la infección del virus de la mancha blanca (WSSV) en camarón blanco del pacífico (Litopenaeus vannamei) a través de técnicas moleculares

Resumen:

El síndrome de las manchas blancas es una enfermedad producida por el virus del síndrome de las manchas blancas (white spot syndrome virus - WSSV) y produce un índice alto de mortalidad en las granjas de camarón blanco del Pacífico (Litopenaeus vannamei) a lo largo de México y el mundo. En los últimos 20 años, las tecnologías de vanguardia han producido avances importantes en estudios básicos sobre bases moleculares y mejoramiento genético de animales de acuicultura. En este proyecto, se van a identificar algunos genes importantes en la infección de este virus por parte del camarón. Hay información previa de la asociación del gen AKT lvakt en la infección por este virus, por su papel importante en el sistema inmune de Litopenaeus vannamei.  Se utilizará secuenciación de nueva generación (NGS) para reconocer zonas dentro de los 44 cromosomas que tiene esta especie e identificar patrones de expresión que sirvan como base para poder implementar estrategias de microinyección embrionaria como la principal fuerza de trabajo para la entrega de reactivos CRISPR / Cas9 y generar soluciones hacia los productores de la región del noroeste de México. Uno de los principales objetivos de la investigación es identificar factores de expresión que arrojen la información necesaria para modificar las condiciones de producción y usar técnicas de biología molecular para promover especies que tengan una mejor respuesta hacia el virus. Para detectar los factores de expresión es importante llevar a cabo un análisis de PCR cuantitativa a tiempo real (Q-PCR) donde sea posible observar el origen genético de la infección.

Palabras clave: L. vannamei; WSSV; NGS; patrones de expresión; microinyección embrionaria; CRISPR / Cas9; Q-PCR.

Introducción

El virus de la mancha blanca, o a su vez, virus del síndrome de la mancha blanca “White spot syndrome virus” (WSSV), no es algo nuevo, siendo que en el año de 1992 se logró identificar inicialmente en zonas de Asia tales como Taiwán, China y Japón.

Es un virus que no solamente afecta al camarón, sino que también es capaz de infectar a diferentes crustáceos, como tal es el caso de la langosta roja australiana de agua dulce. El principal indicador presente en el portador de dicho virus es la acumulación de depósitos blancos de calcio en la zona de la cutícula del exoesqueleto, además, los portadores pueden presentar una especie de coloración que puede variar desde una tonalidad rosada a café, lo cual es bien sabido que se debe a la expansión de sus cromatóforos, bajo rendimiento en la alimentación y permanencia en las orillas de los estanques.  

Estudios realizados respecto al WSSV indican que una mortalidad acumulada puede llegar a rondar entre el 90 y 100%, que se establece en un rango de 3 a 10 días una vez el patógeno ingresa al cuerpo del crustáceo. Más sin embargo hoy en día se conoce que este tipo de manchas pueden ser ocasionadas por otro tipo de patógeno, siendo las bacterias las más susceptibles a ello. Por ende, es muy favorable realizar una prueba PCR (reacción en cadena de la polimerasa) para la identificación del síndrome.  

El problema con este virus es la rapidez con la que se puede llegar a propagar, siendo que puede ser considerado pandémico por la facilidad con la que se propagó en distintas zonas del mundo, llegando a distintos sitios en América. Otra consideración importante es el aspecto económico que esto representa, puesto que la producción de camarón a nivel mundial es muy importante ya que es una actividad que ha tenido un gran impulso en las últimas décadas y su producción se ha podido ver afectado por los ambientes artificiales que favorece a la proliferación de distintos agentes infecciones que representen un peligro inminente para la camaronicultura.

Objetivo

Identificar mediante técnicas de biología molecular los genes asociados a la infección del camarón patiblanco (Litopenaeus vannamei) por el Virus de la Mancha Blanca (WSSV) y alterar su expresión, restringiendo la reproducción del virus utilizando CRISPR/Cas9. Como parte del objetivo se hace alusión a un problema en específico, el cual surge a través de un microorganismo, mismo que no se puede determinar como un agente vivo, puesto que no cumple con las características como tal de un ser vivo, pero bueno, es importante hacernos la pregunta desde un punto de vista social, al momento de que queremos resolver una necesidad hay que tomar en cuenta la finalidad con la que lo vamos a hacer, ya que se debe identificar el impacto que se va a generar con ello. La finalidad del estudio es más que nada proponer y crear una alternativa adversa para el tratamiento del virus camaronero, el cual le hacen llamar como “mancha blanca”. Para ello se busca enfatizar y acrecentar las bases de investigación adquiridas, así como también de poder establecer un campo más amplio para la solución no solo de un virus, sino que pueda generar un fuerte impacto positivo al momento de combatir este tipo de patógenos. Replanteando la cuestión se busca dar a conocer un tratamiento efectivo, no hablando de medicamentos, sino de identificación y sobre todo aislamiento del agente causante del propio mal.

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