Laboratorio bioquimica. DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICAN

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NDETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICAN

1. INTRODUCCION:

Las enzimas pueden ser descritas como catalizadores complejos de origen biológico que tienen un alto grado de especificidad y eficiencia; permitiendo que las reacciones químicas dentro de la célula ocurran rápidamente a través de vías bien definidas. Sin estas proteínas especializadas, la vida tal como es no podría existir.

Para poder mostrar la actividad enzimática se debe tener presente fundamentalmente que cada reacción química debe ser catalizada por una determinada enzima. El reactante o sustancia química que reacciona para dar un producto en un sistema enzimático se llama sustrato, entonces en un organismo vivo habría tantos sistemas enzimáticos como sustratos reaccionantes.

Debido que se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una reacción dada, solo muy pocas enzimas pueden medirse directamente.

En general, la actividad de cualquier sistema enzimático puede ser demostrada de dos maneras:

1. Verificando el sustrato no transformado (SUSTRATO RESIDUAL) después de un tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura.
2. Verificando los productos liberados después de un tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura.

La finalidad  del presente trabajo experimental es determinar la actividad enzimática, utilizando la enzima amilasa salival que tiene  la capacidad de degradar el almidón en maltosa (disacárido reductor) y algo de glucosa; verificando tanto el sustrato residual y los productos formados en dicha reacción.

1. REACTIVOS A UTILIZAR:

• Solución de almidón pH 6.0 al 1%.
• Cloruro de sodio solución  0.1M
• Enzima al 1% (amilasa salival).
• Ácido  Clorhídrico 0.05N
• Solución yodada.
• Reactivo Folin Wu:

1. Solución Cúprica alcalina.
2. Solución fosfomolíbdica.

1. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES (Procedimiento)

• Armar el siguiente sistema:

SISTEMA A:

• Colocar los tubos al baño de agua a  37 °C por 5 minutos.

• Agregar 1 ml. de enzima al tubo II.

• Volverlos a colocar al baño de agua a 37 °C durante 10 minutos.

CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL.

• Inmediatamente cumplidos los 10 minutos. De cada uno de los tubos del sistema anterior, transferir 0.5 ml. a este nuevo sistema.

• Mezclar, observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del  color resultante.

CONTROL  DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR LOS PRODUCTOS FORMADOS (Folin WU)

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