Laboratorio Bioquimica

INFORME DE LABORATORIO

BIOQUIMICA

PRESENTADO POR:

YULY XIMENA PINZON

Código: 1095910031

Tutor Virtual: Golda Meyer Torres

DERLY JESSICA DAZA LADINO

Código: 1121822015

Tutor Virtual: Golda Meyer Torres

YURY MIREYA BELTRAN CALDERON

Código: 20750711

Tutor Virtual: Dolffi Rodríguez

LUZ ADRIANA ZULETA TRUJILLO

Código: 1122117731

Tutor Virtual: Golda Meyer Torres

MARIA MARLEN MORALES MAYORGA

Código: 40381143

Tutor Virtual: Golda Meyer Torres

TUTOR:

FREDY ALEXANDER SÁNCHEZ

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BASIAS Y TECNOLOGICAS

ACACIAS, META

2012

INFORME DE LABORATORIO

BIOQUIMICA

PRESENTADO POR:

LUZ MERY HERNANDEZ

Código: 21244926

Tutor Virtual: Dolffi Rodríguez

WILSON RENE RODRIGUEZ

Código: 17413684

Tutor Virtual: Golda Meyer Torres

FREDY VIÑA QUEVEDO

Código: 86071927

Tutor Virtual: Dolffi Rodríguez

LUZ ADRIANA SARRIA OSORIO

Código: 4040562

Tutor Virtual: Golda Meyer Torres

LUCERO HUESO RIAÑO

Código: 1123511121

Tutor Virtual: Golda Meyer Torres

TUTOR:

FREDY ALEXANDER SÁNCHEZ

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BASIAS Y TECNOLOGICAS

ACACIAS, META

2012

INTRODUCCION

La presente guía de prácticas de laboratorio contiene una serie de experimentos básicos que complementan los conceptos fundamentales. El trabajo de laboratorio utiliza como materiales de experimentación, materias primas de uso común como harinas de cereales y leguminosas, féculas, frutas y verduras, tejidos de origen animal, que ayudan al estudiante a asimilar las técnicas de uso común en la investigación bioquímica con fuentes alimenticias o potencialmente alimenticias.

La investigación no es completa sino se divulgan los resultados obtenidos en

la experiencia. Es importante que el estudiante aprenda la forma de reportar sus datos y a saber interpretar las conclusiones obtenidas por otros investigadores, con el fin de evaluar su propia investigación. Esto hace necesario que elabore un informe donde presente sus datos, resultados y conclusiones obtenidos durante el trabajo experimental.

OBJETIVOS

 Reconocer mediante el uso de reacciones coloreadas y cualitativas la presencia de aminoácidos, proteínas, carbohidratos, ácidos nucleicos y lípidos, como constituyentes de las biomoléculas.

 Cuantificar fracciones proteicas y glúcidos mediante las técnicas de análisis instrumental, volumétrico y gravimétrico.

 Interpretar los resultados obtenidos en cada observación para argumentar los resultados en el análisis de resultados y proponer posibles aplicaciones en los contextos regionales.

 Reconocer a las biomoléculas como unidades fundamentales y su importancia en los diferentes procesos metabólicos

PRACTICA N. 1

“METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE

AMINOÁCIDOS Y PROTEINAS”

OBJETIVOS

 Aplicar pruebas cualitativas generales y específicas que permitan reconocer grupos químicos de los aminoácidos y proteínas.

 Someter soluciones de proteínas a desnaturalización con agentes físicos y químicos.

MARCO TEÓRICO La Ninhidrina La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos. Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres. La Reacción Xantoproteica Los aminoácidos, que contienen un núcleo aromático forman nitroderivados de color amarillo cuando se calientan con ácido nítrico concentrado. Las sales de estos derivados son de color naranja intenso en medio alcalino. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro. La fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el Triptófano, así como todas las proteínas que los contienen, dan positiva la prueba.

Según las guías químicas es una reacción cualitativa, más no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra reacción, como la de Biureth, y se hace un análisis espectro fotométrico. Reacción para el triptófano Este aminoácido se condensa fácilmente con varios aldehídos en presencia de ácidos fuertes para dar compuestos coloreados. En la reacción se utiliza el reactivo de Ehrlich (p-dimetilaminobenzaldehído al 10% en HCL concentrado.) que reacciona con un buen número de compuestos orgánicos tales como índoles, aminas aromáticas y compuestos ureicos para dar complejos coloreados. Reacciones para cisteína y cistina Cuando los aminoácidos y las proteínas que contienen grupos tiólicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la formación de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adición de acetato de plomo. Los grupos tioles también reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de amoníaco para dar un complejo de color rojo. Prueba para Arginina El aminoácido Arginina contiene un grupo guanidino en la cadena lateral, este grupo reacciona con el reactivo de Sakaguchi (a-naftol/agua de Bromo) en medio alcalino para dar un compuesto de color rojo. Prueba de Biureth es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Desnaturalización por calor y pH extremos Una pérdida de la estructura tridimensional suficiente para causar pérdida de la función se llama desnaturalización. Se forma un conjunto de cadenas polipeptídicas con distinto grado de plegamiento. La desnaturalización no significa que siempre se obtenga la cadena polipéptidica totalmente desplegada. Los productos de desnaturalización en solución se agregan físicamente y según las condiciones de pH y fuerza iónica, precipitan. El objetivo de elegir un paso de purificación desnaturalizante es crear las condiciones donde la proteína de interés no se desnaturalice mientras que los otros componentes se desnaturalicen y precipiten. Precipitación con cationes y aniones pesados y sales concentradas Los cationes de metales pesados y los aniones de elevado peso molecular son muy usados en la separación de proteínas y en la preparación de filtrados libres de proteínas. A pH neutro por lo general las proteínas tienen carga neta negativa y se combinan fácilmente con iones de metales pesados que, al neutralizar la carga producen la precipitación. A pH por debajo del punto isoeléctrico en cambio, se combinan con aniones porque presentan carga neta positiva. Soluciones concentradas de sales, de sulfato de amonio.

MATERIALES:

Tubos de ensayo, gradillas, goteros, baño maría.

REACTIVOS:

Soluciones al 1% en HCL IM de glicina, tirosina, triptófano, Cisteína, cistina, prolina, hidroxiprolina, arginina y fenilalanina. PROCEDIMIENTO a. Reacción de la ninhidrina

b. Reacción xantoproteica c. Prueba del ácido glioxílico d. Prueba de Ehrlich para triptófano e. Reacciones para cisteína y cistina

f. Reacción para la arginina g. Ensayo de Biureth para proteínas: h. Desnaturalización por calor y pH extremos

Esto da como

Resultado positivo ya que la intensidad del

Color si viro pero no con la intensidad

Suficiente entonces si hay presencia d

Enlaces peptidicos pero no en gran numero

Hubo una separación, en

La superficie de la solución

Queda un sobrenadante

Separado de la fase liquida tonalidad amarilla.

Los compuestos que contiene un radical

Hidrobenceno (la tirosina) reaccionan con el reactivo de, millón formando compuestos rojos, los únicos aminoácidos fenolicos sonla tirosina y sus derivados y solamente ellos dan la reacción positiva

rojos, los únicos aminoácidos fenolicos son

la tirosina y sus derivados y solamente ellos

dan la reacción positiva

Se presenta una tonalidad

Naranja y fraccionamiento

De la fase liquida,

sobrenadante y

precipitado

Separación en donde el

Sobre nadante que es la

Mayoría de la solución

Toma un color café pálido,

y el precipitado es claro

Siendo la fase liquida con

Residuos en suspensión.

Se observa un sobrenadante amarillento en

Medio un fase liquida seguida de un

Precipitado de color naranja, esta prueba es

positiva ya que los aminoácidos que

Contienen un núcleo aromático el triptófano y

Fenilalanina, por esto se forman

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