MEDIOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES

IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS EN MEDIOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES

VIVAS SERVITA Angely Rothxany, URBINA GONZALEZ Katia Madeley,ORTIZ TARAZONA Sandy Yulieth

RESUMEN:

Esta práctica se basó en asemejar microorganismos los cuales pueden estar constituidos químicamente para obtener un solo propósito o combinar varios aspectos en un solo medio aislando grupos específicos de microorganismos y diferenciándolos de otros, la diferencia en la capacidad del empleo de los nutrientes constituye parte de las bases para la identificación tradicional. Para esta tarea se utilizan medios selectivos y diferenciales. Los Medios selectivos: Son aquéllos que los cuales inhibirán o prevendrán el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias. Medios diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias con base en alguna característica observable. Con la orientación de estos se realizaron diversas siembras en agares tanto solidos como líquidos los cuales son: (SAL MANITOL, BAIRD PARKER, MOSSEL, SELECTIVO PARA B. cereus, XLD, PALCAM, CENTRIMIDE, E.M.B, CHROMOCULT, HEKTOEN, MacCONKEY, CALDO L.M.X, CALDO G.C) implementándose los microorganismos: S. aereus, E. coli, B cereus, Salmonella, Listeria spp para su relativo reconocimiento.

PALABRAS CLAVES: Microorganismos, diferencias, selectivos, diferenciales, agares.

INTRODUCCION:

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología, por lo que un control en su fabricación, preparación conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras.

Medios selectivos: Son aquéllos que poseen uno o más componentes añadidos, los cuales inhibirán o prevendrán el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias y/o promoverán el crecimiento de las especies deseadas. Se pueden ajustar las condiciones físicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo selectivo específicamente de los organismos de interés.

Medios diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias con base en alguna característica observable macroscópica-microscópicamente en su patrón de crecimiento en el medio en que se presente, ya sea por producción de algún pigmento o por cambios de color en el medio debido a indicadores de pH, o por halos de degradación de algún componente en el medio de cultivo.

Los medios empleados para seleccionar y/o diferenciar grupos de bacterias son:

SALADO MANITOL: Este medio de cultivo contiene altas concentraciones de sal (7.5% NaCl), lo cual inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias diferentes a los Staphylococcus. El manitol incorporado en el medio realiza una función diferencial pues solo algunos Staphylococcus pueden fermentarlo. La adición de rojo fenol, como indicador de pH permite destacar la producción de ácido como resultado de la vía fermentativa para el metabolismo del manitol, estos microorganismos forman una zona amarilla periférica a su crecimiento. Staphylococcus que no fermentan el manitol no producirán este cambio de coloración en el medio.

Composición:

Extracto de carne 1.0g

Peptona de carne 5.0g

Tripteina 5.0g

Manitol 10.0g

Cloruro de sodio 75.0g

Rojo de fenol 0.025g

Agar 15.0g

Agua purificada 1000ml

pH final 7.4 ± 0.2

BAIRD PARKERD: Es un medio moderadamente selectivo y de diferenciación para el aislamiento y recuento de Staphylococcus aureus en alimentos, muestras ambientales y clínicas. Es un medio parcialmente selectivo que utiliza la capacidad de los estafilococos de reducir el telurito a telurio y detectar la lecitinasa a partir de la lecitina del huevo. El agar Baird-Parker se utiliza ampliamente y se incluye en numerosos procedimientos estándar para el análisis de alimentos, cosméticos o agua de piscinas con el fin de detectar la presencia de Staphylococcus aureus. Así mismo, puede utilizarse para el aislamiento de S. aureus a partir de muestras clínicas y también se denomina agar huevo-telurito-glicina-piruvato

Contiene las fuentes de carbono y nitrógeno necesarias para el crecimiento. La glicina, el cloruro de litio y el telurito potásico actúan como agentes selectivos. La yema de huevo constituye el sustrato para determinar la producción de lecitinasa y, además, la actividad de lipasa. Los estafilococos producen colonias de color de gris oscuro a negro debido a la reducción del telurito; los estafilococos que producen lecitinasa descomponen la yema de huevo y crean zonas transparentes alrededor de las colonias correspondientes. Es posible que se forme una zona de precipitación debido a la actividad de lipasa. El medio no debe utilizarse para el aislamiento de estafilococos diferentes de S. aureus.

Composición:

Peptona de caseina 10.0g

Extracto de carne 5.0g

Extracto de levadura 1.0g

Piruvato sódico 10.0g

Glicina 12.0g

Cloruro de litio 5.0g

Agar – agar 15.0g

Emulsión yema de huevo telurito 50ml

Sulfametacina 0.05g

MOSSEL: Este medio se utiliza para el aislamiento e identificación de Bacillus cereus a partir de alimentos. La polimixina B por ser uno de sus componentes específicamente un antibiótico produce el aislamiento de Bacillus cereus desarrollándose sin dificultad, inhibiendo el crecimiento de la flora acompañante presente en la muestra.

El medio contiene manitol e indicador de pH rojo-fenol. La flora acompañante es normalmente manitol (+), lo que hace virar al indicador amarillo, por acidificación del medio, como consecuencia de la fermentación del mismo. El Bacillus cereus es manitol (-) por lo tanto el medio aparece de color rosado, por alcalinización debido al metabolismo nitrogenado. Finalmente Bacillus cereus posee la enzima lecitinasa, una fosfolipasa que hidroliza la lecitina de la yema del huevo, cuyos productos precipitan dando un halo blanco opaco alrededor de las colonias.

Composición:

Peptona de carne 10.0g

Extracto de carne 1.0g

Manitol 10.0g

Cloruro de sodio 10.0g

Rojo-fenol 0.025g

Agar-agar 15.0g

SELECTIVO PARA B cereus: Medios diferenciales: este medio se cultivo se aventaja a otros similares en lo referente a la demostración cuantitativa y cualitativa de Bacillus cereus.

El Bacillus cereus es manitol-negativo. El contenido en manitol del medio de cultivo posibilita pues la separación de la flora acompañante manitol-positiva, que se caracteriza por un viraje al amarillo del indicador de pH Rojo-Fenol.

El Bacillus cereus es resistente frente a ciertas concentraciones de Polimixina que inhibe a la flora usual de acompañante. No obstante, la adición de Polimixina solo es necesaria cuando se suponga que la flora acompañante es probablemente abundante.

El Bacillus cereus forma lecitinasa. Los productos de degradación insolubles de la lecitina de yema de huevo se acumulan alrededor de las colonias de cereus, formando un precipitado blanco. En muchas cepas la reacción de la lecitinasa se presenta ya muy precozmente de forma que conque, con frecuencia, es posible hacer hacer una identificación rápida a las colonias de cereus, incluso antes de que los eventuales gérmenes de acompañamiento polimixina-resistentes alcancen pleno desarrollo.

Composición:

Peptona de carne 10.0g

Extracto de carne 1.0g

Manitol D(-) 10.0g

Cloruro sódico 10.0g

Rojo fenol 0.025g

Agar - agar 12,0g

Emulsión yema de huevo 100ml

Polimixina B sulfato 0,01g

CENTRIMIDE: Se usa para el aislamiento y diferenciación de Pseudomonas aeruginosa, a partir de diversos materiales. Sirve para conseguir una notable inhibición de la flora acompañante, una concentración de 0,3 g/litro ejerce una suficiente inhibición de los microorganismos acompañantes, perjudicando mínimamente el crecimiento de las Pseudomonas aeruginosa. El desarrollo del color a cargo de las Pseudomonas aeruginosa transcurre sin obstáculo en este medio de cultivo. Para aumentar el efecto inhibidor sobre la flora acompañante se recomienda añadir 15 Ug/ml de ácido nalidixico.

Composición:

Peptona de gelatina 20.0g

Cloruro de magnesio 1.4g

Sulfato de potasio 10.0g

N-cetil-N trimetilamoniobromuro 0,3g

Agar – agar 13.0g

Glicerina 10ml

PALCAM: Es un medio altamente selectivo y diferencial para el aislamiento y detección de Listeria en muestras de origen clínico y biológico.

Mediante el PALCAM agar, puede aislarse cuantitativamente Listeria monocytogenes al tiempo que las bacterias gram-negativasy la mayoría de gram-positivas, presentes en la muestra como flora acompañante, son inhibidos.

La selectividad del medio se debe a las sustancias inhibidoras del crecimiento, tales como Polimixina B-sultafo Acriflavina, cloruro de litio y Ceftacidina.

L. monocytogenes hidroliza el glucósido esculina formándose glucosa y esculetina. Esta última, con el

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