Micropipetas

MICROPIPETAS - Funcionamiento de la micropipeta

La micropipeta puede ser de dos tipos según su funcionamiento:

- De desplazamiento de aire.

La pipeta estándar. El pistón no está en contacto con el liquido, sino que queda una cámara de aire entre el pistón y el liquido

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Fig: Esquema del interior de una pipeta de desplazamiento de aire donde entre otros se distingue claramente el pistón y la cámara de aire.

Fig: Esquema del funcionamiento de una pipeta de desplazamiento de aire

1: Para aspirar líquido se baja el pistón a su posición más baja y se introduce la punta de la pipeta en el líquido que se quiera aspirar

2 y 3: Se sube el pistón hasta la posición determinada para la cantidad a pipetear. Detrás de la cámara de aire el líquido sube en la misma proporción que ha subido el pistón.

4: Se dispensa en el recipiente de dispensación volviendo a bajar el pistón, con lo cual se desplaza la cámara de aire y a su vez se hace salir el liquido aspirado anteriormente

- De desplazamiento positivo:

Para líquidos viscosos o volátiles. El pistón contacta directamente con el líquido

Fig: Esquema del funcionamiento de una pipeta de desplazamiento positivo

1: Para aspirar líquido se baja el pistón a su posición más baja. Al bajar el pistón de la pipeta, bajamos el pistón de la punta. Se introduce la punta de la pipeta en el líquido que se quiera aspirar

2 y 3: Se sube el pistón hasta la posición determinada para la cantidad a pipetear. Detrás del pistón de la punta el líquido sube en la misma proporción que ha subido el pistón y en contacto con él.

4: Se dispensa en el recipiente de dispensación volviendo a bajar el pistón de la pipeta, con lo cual se baja el pistón de la punta y a su vez se hace salir el liquido aspirado anteriormente

MICROPIPETAS - Pautas generales y Técnicas de pipeteo

Pautas generales

- Revisar la pipeta al inicio del día de trabajo para retirar suciedad y polvo

- Ajustar el volumen en el rango especificado para la pipeta

- Sujetar la pipeta de forma que el reposamanos de la pipeta descanse sobre el dedo índice

- Para maximizar exactitud, la pipeta, la punta y el líquido deben estar a la misma temperatura

- Comprobar que las puntas son las adecuadas para la pipeta

- Usar las puntas una sola vez

- Enjuagar la punta varias veces en el liquido a pipetear antes del pipeteo para mejorar la exactitud

- No volver la pipeta del revés, de forma que el liquido de la punta afecte al interior de la pipeta

- Evitar contaminaciones de las puntas usando el eyector y los guantes

- Guardar las pipetas hacia arriba

- Calibrar las pipetas de forma regular, al menos una vez al año

Técnicas de pipeteo

- Pipeteo Normal (forward pipetting)

Recomendada para soluciones acuosas como tampones, ácidos diluidos y bases

1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el primer tope

Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en la siguiente tabla

Volumen (μL) Profundidad óptima de inmersión (mm)

0,1 - 1 1

1- 100 2 - 3

101 - 1000 2 - 4

1001 - 10000 3 - 6

2. Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial. Sacar la punta del líquido tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido del exterior de la punta

3. Dispensar el líquido en el recipiente presionando el embolo hasta el primer tope y después hasta el segundo. De esta forma vaciamos totalmente la punta

4. Sacamos la punta del recipiente tocando las paredes del mismo y dejamos el émbolo en su posición inicial

- Pipeteo Reverso (reverse pipetting)

Esta técnica se usa para pipetear soluciones con una gran viscosidad o tendencia a formar espuma. Sólo se puede realizar con pipetas de desplazamiento de aire

1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el segundo tope

Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en la siguiente tabla

Volumen (μL) Profundidad óptima de inmersión (mm)

0,1 - 1 1

1- 100 2 - 3

101 - 1000 2 - 4

1001 - 10000 3 - 6

2. Soltar

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