Utilización de micropipetas

Universidad de Panamá

Facultad de Medicina

Escuela de Medicina

Departamento de Biología Celular y Molecular

Laboratorio de Biología # 3

“Utilización de las Micropipetas”

Profesora: Maribel A. González T.

Integrantes:

Isabella Riquieri

Céd. EC-42-11650

Olga Candanedo

Céd. 4-783-2146

Luis Pretto

Céd. 8-912-2428

Grupo 2.1a

Fecha:

14 de septiembre de 2015

INTRODUCCIÓN

Antiguamente las pipetas eran muy utilizadas para la medición de volúmenes pequeños; sin embargo, el pipeteado de microlitos (µl) –  siendo que 1µl equivalen a 10-6L – era un proceso muy incómodo en el que era necesario utilizar diversos tipos de capilares de vidrio y hasta la succión con la boca. Debido a esto, se requería experiencia para hacerlo, además de las roturas, imprecisión, el peligro de aspiración, la esterilidad y la limpieza que eran un gran problema. En 1956, Heinrich Schnitger en el Instituto de Bioquímica de la Universidad de Marburgo en Alemania desarrolló un prototipo de micropipeta, el cual fue evolucionando hasta el aparato que conocemos en el día de hoy. Esta invención fue muy revolucionaria y dio un gran avance en las experimentaciones en la Biología Molecular. Además, este aparato fue diseñado de tal forma que miden la cantidad de forma muy precisa – lo que es esencial para la experimentación

La micropipeta, la cual es utilizada para absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos, es muy delicada y costosa, por lo que es primordial saber manejarlo apropiadamente. Existen diferentes tipos de micropipetas, P10, P100, P200 y P1000, las cuales poseen un límite inferior y otro superior, y no se debe ultrapasar tales límites para no dañar ni perder su calibración. Asimismo, existen diferentes modelos de micropipetas: las individuales (que poseen solamente una punta) y las múltiples (que poseen más de una punta). Aunque pueden variar la posición de sus partes dependiendo del fabricante, todos modelos tienen los mismos elementos que funcionan de la misma manera: el botón de control o embolo (permite succionar y dispensar el líquido); el botón de eyección o expulsión (al apretar, la punta de la micropipeta es eyectada); la perilla de volumen o control de volumen (nos deja seleccionar la cantidad de líquido que será medido); ventana de número o ventana de volumen (consiste en una ventana en la cual aparece la cantidad de volumen que se medirá); y la punta de la micropipeta (lugar donde se colocan las puntas las cuales van a contener el líquido).    

El primer paso para llenar a la micropipeta es seleccionar la cantidad de volumen deseado, para ello, es necesario girar la perilla hasta que aparezca la cantidad de volumen en la ventana de número (en caso de que haya un botón de seguridad, este debe ser presionado para permitir la realización del proceso). Después es necesario colocar la punta de micropipeta – es importante seleccionar aquella de tamaño ideal para el aparato y la cantidad que se va a medir. Luego, de oprime el botón de control hasta el primer tope, se coloca la punta en el líquido (no tocar el fondo del recipiente pero colocarlo a una profundidad ideal para evitar la entrada de aire en la punta) y después se oprime el botón de control hasta el segundo tope (no se debe hacerlo de manera rápida para que el líquido no salpique dentro de la punta).  Es importante esperar aproximadamente un segundo con la micropipeta en el líquido para evitar la entrada de aire. Para la expulsión del líquido, se lleva la micropipeta hasta el recipiente final, se apoya la punta en la pared del mismo y se oprime el botón de control hasta el primer tope y después hasta el segundo. Este movimiento debe ser hecho a una velocidad moderada. Para aquellas soluciones de alta viscosidad, tanto el llenado como la expulsión deben ser realizados más lentos.

Existen algunas reglas de cuidados especiales para el buen uso del instrumento, tales como: no girar la perilla del volumen más allá de lo permitido; nunca utilizar la micropipeta sin la punta; no acostar la micropipeta cuando este llena; no sumergir el extremo inferior de la micropipeta en el líquido; no flamear las puntas; no permitir que el botón de control se retraiga después que el líquido es expelido.

OBJETIVO GENERAL

• Conocer el funcionamiento y manejo apropiado de las micropipetas

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Identificar los tipos de micropipetas que se utilizan en biología molecular
• Describir las diferentes partes de una micropipeta
• Utilizar la micropipeta adecuada para el volumen a medir
• Adquirir destreza en el uso de las micropipetas
• Medir algunas soluciones con volúmenes exactos desde 1 hasta 1000l[pic 1]

METODOLOGÍA

1. Indicamos como se colocó en la ventana de volumen de la micropipeta las siguientes medidas e identificamos que micropipeta se utilizó. Se utilizaron las siguientes medidas: 2,5l; 29,0l; 98,2l; 164,8l.[pic 2][pic 3][pic 4][pic 5]

1. De acuerdo a las micropipetas que tuvimos a disposición, graduamos los siguientes volúmenes; para ello, dibujamos como debe graduarse los volúmenes para cada tipo de micropipeta utilizando la siguiente tabla:

P1000: 550, 430, 1000l[pic 7]

P200: 36, 87, 200l[pic 8]

P20: 2.5, 19.5, 15l[pic 10]

1. Con la ayuda de cada una de las micropipetas adecuadas, medimos una serie de sustancias. Además, observamos la experiencia que tuvimos con cada una de las sustancias.

RESULTADOS

1. Los volúmenes dados anteriormente serian graduados de la siguiente manera:

**El decimal en este caso no aparecería en la ventana de número, sino que debajo de la unidad hay una regleta, y se gira la perilla de volumen hasta que esta regleta marque la cantidad decimal requerida.

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