Práctica 1. MANEJO DE MICROPIPETAS AUTOMÁTICAS

Universidad de Guanajuato

DCNE

Laboratorio de Biología Molecular

Dra. María del Carmen Cano Canchola

Gamiño Tostado Víctor Manuel

Equipo 1

Lic. Químico farmacéutico biólogo.

Práctica 1. MANEJO DE MICROPIPETAS AUTOMÁTICAS.

INTRODUCCIÓN

La habilidad para medir de manera exacta, reproducible y transferir volúmenes menores de 1 mL es crítico obtener resultados exactos, para ello se requiere un instrumento que nos facilite la absorción de pequeñas cantidades, ese instrumento se llama Micropipeta. Se destacan las pipetas de volumen fijo y las de volumen variable.  

Para utilizar una pipeta se requiere que el laboratorio brinde unas condiciones adecuadas de comodidad, limpieza e iluminación. También debe tomarse en cuenta que:

1. La pipeta se encuentra en posición vertical, cuando se requiera aspirar un líquido.[pic 1]
2. Confirmar la recomendación que efectúa el fabricante de la pipeta con relación a la profundidad mínima de inmersión de la punta de la pipeta.
3. Humedecer previamente las puntas de las pipetas para reducir la posibilidad de que se aspiren burbujas de aire.
4. Remover, después de llenar la pipeta, cualquier gota que se adhiera a la punta de la pipeta.
5. Dispensar el líquido contenido en la pipeta tocando con la punta de esta la pared del recipiente receptor.

Para tener el manejo adecuado de las Micropipetas el alumno se familiarizará con ellas mediante el pipeteo de diferentes volúmenes de agua destilada, sacará un promedio y con la desviación estándar comprobará si existen erros en la Micropipeta (mala calibración) o al momento de pipetear (sujeto manipulador).

EXPERIMENTO

Para llevar a cabo el objetivo de esta práctica utilizaremos Micropipetas de  20,  200 y 1000µL, puntas amarillas y azules, un vaso de precipitado con agua destilada, tubos Eppendorff y un recipiente de plástico para desechar las puntas.

La parte experimental consistió en el pesaje de 12 tubos Eppendorff vacíos en series de tres, posteriormente fueron llenados con diferentes volúmenes de agua destilada de la siguiente manera:

• 3 tubos con 100µL de agua
• 3 tubos con 250µL de agua
• 3 tubos con 500µL de agua
• 3 tubos con 1000µL de agua

Los 12 tubos con agua fueron pesados para observar el cambio en el peso. Se registraron los pesos iniciales y finales, se calcularon las diferencias y la desviación estándar para graficar los resultados.

CÁLCULOS Y RESULTADOS

Serial de Micropipetas        

0.5-10 µL 10Y4923                20-200 µL 09YD808                100-1000 µL 06Z5649

Desviación estándar para tubos No. 1

               [pic 6][pic 7]

-6[pic 8]

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Desviación estándar para tubos No. 2

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Desviación estándar para tubos No. 3

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Desviación estándar para tubos No. 4

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-7[pic 21]

 [pic 22]

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Los resultados que se obtuvieron fueron bastantes variados para cada uno de los tubos. Si analizamos los cálculos podemos observar que la desviación estándar de los tubos no. 1 es el valor más alto, esto nos indica que los datos se encuentran bastantes dispersos con respecto a la media estadística como podemos observar en la figura 1.

[pic 23]

Figura 1. Gráfico de la media estadística de los tubos no. 1

Con respecto a los tubos no. 2 apreciamos que la desviación estándar es menor en comparación con los tubos no. 1, esto nos india que la diferencia de volúmenes se encuentra más cerca de la media estadística como se observa en la figura 2.

[pic 24]

Figura 2. Gráfico de la media estadística de los tubos no. 2

 Con respecto a los resultados de los tubos n. 3 notamos que la desviación es un valor pequeño por lo tanto como podemos ver en la figura 3 la diferencia de volumen se encuentra más cerca de la media estadística.

[pic 25]

Figura 3. Gráfico con la media estadística de los tubos no.3

Los tubos no. 4 presentaron la desviación más baja de todos, por lo que los valores se acercan más a la media estadística como se observa en la figura 4.

[pic 26]

Figura 4. Gráfico con la media estadística de los tubos no.4

Podemos notar que los tubos con un menor volumen son los que tienen menos dispersión, esto nos indica que entre menor sea el volumen de la Micropipeta se tendrá mejor exactitud en los experimentos.

CONCLUSIONES

Dentro del laboratorio de Biología Molecular e Ingeniería Genética se manejan volúmenes bastante pequeños, esto se debe a que los trabajos realizados requieren manipular solo una mínima cantidad de reactivos para experimentar con el DNA, por esta razón es importante saber hacer un buen manejo de las Micropipetas y aprender a pipetear volúmenes bastante pequeños.

En esta práctica realizada logramos hacer un buen manejo de cada Micropipeta, solo manejamos agua para observar la diferencia de volúmenes en cada tubo que utilizamos, esto se hizo con el fin de saber si existen errores en el pipeteo de la persona que maneja la Micropipeta o bien que exista un mal ajuste en ésta.

Analizando los resultados podemos ver que los valores que se encuentran bastante alejados de la media son los volúmenes de la Micropipeta de mayor cantidad, esto nos indica que entre mayor sea un volumen pipeteado existe mayor probabilidad de cometer errores. Sin embargo existen valores bastante dispersos en las otras Micropipetas estos pueden ser causa de un pipeteo erróneo por parte del estudiante.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles suelen ser las causas más comunes del mal micropipeteo en el laboratorio y como podrían corregirse?

• El uso de las punteras.
• Mantenimiento y la limpieza del instrumento.
• Proceso de pipeteado y el ritmo de pipeteo.
• Ángulo de inclinación de la pipeta.
• Profundidad de inmersión.
• Periodo de espera.
• Falta de trazabilidad (calibración).

Se puede mejorar mediante una buena capacitación acerca del uso de Micropipetas, esto permitirá que las personas las utilicen de forma adecuada.  

1. ¿Cuál es el motivo de mantener  siempre la pipeta en posición vertical?

Garantiza que no se presente incertidumbre por variaciones mínimas en la cabeza del líquido.

1. ¿Qué resultados se esperan  cuando en una práctica del laboratorio no se miden con exactitud los volúmenes de alguna muestra o líquido?

Que no se lleven a cabo reacciones químicas, perdida de rendimiento, amplio margen de error, perdidas de la muestra, entre otros.

1. ¿Porque en biología molecular se usan volúmenes tan pequeños a diferencia de otras áreas?

Porque es un área que trabaja con material genético, éste se obtiene en cantidades pequeñas y para analizarlo mediante distintas técnicas se deben usar volúmenes pequeños de los reactivos a utilizar, de lo contrario la muestra se perdería.

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