CUALIFICACION DE MICROPIPETAS

CUALIFICACION DE MICROPIPETAS

1. OBJETIVO:

• Desarrollar habilidad para manipular y manejar diversos tipos de micropipetas.
• Verificar la precisión y exactitud del volumen aportado por una micropipeta como una forma de asegurar la calidad de los ensayos realizados que involucren su utilización.

1. FUNDAMENTO TEORICO:

1. MICROPIPETA: La micropipeta es un instrumento de recolección de sustancias, siendo un tipo de pipeta y destacando por estar diseñada especialmente para la recolección de muestras pequeñas. La misma se suele fabricar de vidrio, aunque otras partes que la componen son de plástico y posee una graduación para controlar el volumen de las sustancias. La micropipeta está conformada por una jeringa con un pistón accionado con resorte y otro coaxial para garantizar el hermetismo, con una punta de plástico removible. Al principio esta punta fue diseñada de teflón, pero luego fue rediseñada en polipropileno, haciéndola más económica de producir. Permitiendo que sean fácilmente desechables. (Wikipedia, 2018) 

Todas las pipetas de pistón disponen de puntas desechables para minimizar los riesgos de contaminación. Para facilitar el uso del tipo de punta adecuado los fabricantes han adoptado un código de color según el volumen a dispensar y que en las de uso más general coincide con el color de las puntas utilizadas.

1. BALANZA ANALITICA:  La balanza es un instrumento que mide la masa de un cuerpo o sustancia, utilizando como medio de comparación la fuerza de la gravedad que actúa sobre el cuerpo. Dependiendo del trabajo que se quiera realizar, se selecciona el tipo de balanza más adecuada en cuanto a sensibilidad y rapidez en la pesada. La sensibilidad de una balanza depende de su capacidad: una balanza diseñada para pesar kilogramos difícilmente tendrá la sensibilidad necesaria para tener reproducibilidad en pesadas de miligramos. En prácticas de laboratorio para determinar la masa con mucha precisión se utiliza la balanza analítica ya que este tipo de balanza admite una carga de 50 a 200g y mide la masa con una precisión del orden de 0,1 a

0,05mg. (EcuRed, 2013) 

1. EL TERMOHIGRÓMETRO: Es un aparato diseñado para medir la humedad relativa y la temperatura ambiental. La humedad relativa es definida como la relación entre la cantidad de vapor de agua por m3 de aire, y la máxima cantidad de vapor de agua que puede contener ese aire a una temperatura determinada. (Alley, 2017) 

1. EXACTITUD: La suelen identificar también como error sistemático. Se obtiene mediante el cálculo del porcentaje de error de la media experimental obtenida con respecto al valor teórico. Puede tener signo negativo (implica que alícuota por defecto) o signo positivo (por exceso). (Tortosa, 2011) 

1. PRECISIÓN: Lo suelen identificar como error aleatorio. Se obtiene con el valor de la desviación estándar que implica todo el intervalo, es decir, dos veces el valor numérico de la desviación estándar. (Tortosa, 2011)

1. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

1. Balanza analítica cualificada sensibilidad 0,1 mg
2. Micropipetas p200 y p1000 
3. Puntas amarillas y azules. 
4. Vasos de precipitación de 20, 50 y 100 mL 
5. Guantes descartables de látex 
6. Agua destilada. 
7. Termómetro con escala graduada de bajo rango 
8. Medidor de humedad relativa y de presión atmosférica 

1. PROCEDIMIENTO: 

Dependiendo del rango de volumen de la micropipeta, utilizar rangos que involucren la décima parte del rango. Así si la pipeta es de 20-200 uL se tomarán cada 20 uL, en cuyo caso:

1. Colocar en balanza analítica un vaso de precipitados de 50 mL vacío, limpio y seco.
2. Esperar que estabilice completamente se valor y anotar con sus 4 cifras decimales.
3. Colocar una punta a la micropipeta y especificar el volumen de 20 μL.
4. En un vaso de precipitados de 100 mL colocar unos 90 mL de agua destilada.
5. Presionar lentamente hasta el primer toque la micropipeta.
6. Introducir la punta de la micropipeta a una profundidad entre 3 y 5 mm debajo de la superficie del agua destilada, y succionar verticalmente el volumen especificado de 20 μL
7. Depositar cuidadosamente el volumen tomado en el vial que está dentro de la balanza, presionando hasta el segundo toque de la micropipeta, y de allí al tercero (al fondo del émbolo).
8. Anotar el peso registrado con sus 4 cifras decimales.
9. Repetir la misma operación 5 veces desde el punto (5), tomando como valor inicial de cada medición, el peso registrado de la medición anterior.
10. De ser necesario colocar otro vaso y anotar el valor de su peso. (si no hay evaporaciones considerables podría utilizarse el mismo vaso inicial)
11. Fijar ahora en la micro pipeta, el volumen de 40 μL y repetir las mismas operaciones que las realizadas con el volumen de 20 μL, anotando en todos los casos los respectivos valores.
12. Repetir las operaciones con el resto de volúmenes.
13. Medir la temperatura del agua y determinar su densidad usando tablas de corrección de densidad en función de la temperatura.

1. CÁLCULOS

1. Datos de medición de temperatura del agua:

• Temperatura del agua (°C): 20,9
• Densidad del agua corregida (g/cm3):   ?
• Rango de micropipeta a cualificar: 100 – 1000 μL

Determinamos la densidad del agua corregida:

21-20,921-20=998,08-H2O998,08-998,29

0,1-0,21=998,08-H2O

H2O=998,101kgm3=0,998101gcm3=998,101×10-6gμL

1. Si al tomar datos cada 100 μL, se obtuvieron los sgtes datos, entonces complete las tablas correspondientes:

En el primer caso:

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