Microscopia

TITULO

Microscopia.

OBJETIVOS

Identificar cada una de las partes del microscopio y aprender a utilizarlos correctamente

Formular y enumerar los cuidados básicos que se debe tener en cuenta en el uso y manejo del microscopio durante las sesiones de práctica

Observación en el microscopio de microorganismos procedentes de muestras de levadura de panadería y muestras de yogurt.

FUNDAMENTO

• Manejo y funcionamiento del microscopio que en nuestras caso será óptico. Se trata de conocer las diferentes partes del microscopio tanto del sistema óptico como del sistema mecánico. Aprender el manejo para la observación de muestras, como colocar los objetivos, como realizar enfoques y como utilizar objetivos de inmersión.

• Manipulación de muestras solidas liquidas y en tinción para la observación de microorganismos procedentes de las muestras. Los microorganismos podemos observarlos de diferentes maneras con lo que utilizamos diferentes técnicas:

 En fresco: Observamos forma tamaño pero con una resolución baja. Utilizamos la muestra de levadura y yogurt para esta observación colocada directamente sobre el porta

 Con tinciones: Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, aumenta el contraste entre las células y el medio, nos permite distinguir estructuras celulares. Las tinciones pueden ser :

o Simple: Utiliza un solo colorante, por lo que la célula queda teñida del colorante utilizado.

o Tinción Gram: No todas las células son iguales en cuanto a su composición química y esta característica nos permite realizar tinciones en las que se puedan distinguir unos microorganismos de otros. La tinción gran nos permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias Gram + y Gram –, basado en su diferente estructura de la pared celular, cada una quedara teñida de un color diferente lo que facilita su identificación. El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, `por lo que se observan de color purpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lípido de la pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dado como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio.

MATERIALES

• Microscopio.

• Portaobjetos de vidrio

• Asas de siembra.

• Cubre objetos.

• Cristalizador

• Mechero Bunsen

• Frasco lavado

• Agua destilada.

REACTIVOS

• Colorantes: cristal violeta y safranina.

• Etanol

• Lugol

MUESTRAS

• Levadura de panadería

• Yogurt natural

PROCEDIMIENTO

Las muestras utilizadas son una mezcla de levadura diluida en agua, y otra de yogurt natural marca “Activia” para su observación en:

 En fresco: Con esta técnica utilizamos tanto la muestra de levadura como de yogurt.

o Muestra líquida de levadura: La muestra se pone directamente sobre el porta con el asa de siembra, sin necesidad de gota de agua se cubre con el cubre porta y se pasa a su observación.

o Muestra sólida de yogurt: La muestra se pone en el porta sobre una gota de agua, utilizamos para depositar la muestra un asa de siembra previamente flameada en el mechero, la muestra debe extenderse muy bien sobre el porta, la fijamos con el mechero, y procedemos a su observación con los diferentes aumentos. Primero 4x después 10X y 40X y finalmente con aumento de 100x para lo que tapamos la muestra con el cubre ponemos una gota de aceite de inmersión y movemos la lente del microscopio hasta que la lente toque el aceite y enfocamos.

 Tinción simple: Utilizamos la muestra de levadura para realizar la tinción. La muestra de levadura esta diluida en agua, la extendemos sobre la porta, con una asa de siembra previamente flameado, la dejamos secar y

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