Microscopia

SESION 2. PRÁCTICA 1. MICROSCOPÍA

OBJETIVOS

1. Aprender a utilizar adecuadamente el microscopio, y los cuidados que este requiere.

2. Observar preparaciones temporales o permanentes en el microscopio óptico.

INTRODUCCIÓN

El microscopio es un instrumento óptico que amplifica la imagen de un objeto pequeño. Mediante un sistema de lentes y fuentes de iluminación se puede hacer visible un objeto microscópico. Los microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el tamaño original. Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaños, formas y composiciones distintas, la mayoría de ellas pueden verse, algunas a simple vista, y otras mediante instrumentos. Para poder observar a la célula es necesario recurrir a equipos como el microscopio, de este existen diversas variedades, los cuales están diseñados a lo que pretendemos observar y como ejemplo tenemos a:

Microscopio óptico

Es un instrumento (de un lente o varios lentes), que amplifica una imagen y permite la observación de mayores detalles. El poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mínimo a esa distancia. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la información. La resolución depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor de la muestra, la calidad de la fijación y la intensidad de la coloración. Teóricamente la máxima resolución que se puede alcanzar es de 0,2 μm dada por una luz con longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (sensible por el ojo humano) y con objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolución. Existen distintos microscopios ópticos generales y de investigación que se diferencian en factores, tales como la longitud de onda de la iluminación, la alteración física de la luz que incide en la muestra y procesos analíticos que se aplican a la imagen final.

El microscopio compuesto está formado por tres sistemas: 1. Sistema de iluminación; 2. Sistema óptico y 3. Sistema mecánico.

Sistema de iluminación

Fuente de iluminación: Es una lámpara halógena (6V) que permite el encendido o el apagado con un interruptor y cuya intensidad puede ser graduada. Puede tener en su parte superior un anillo para permitir la colocación de filtros que facilitan la visualización.

Diafragma de campo. Está situado en la base del microscopio y su función es la de regular el diámetro de la emisión de la luz a fin de que se ilumine solo el área de campo visual, es decir, controla la cantidad de luz que atraviesa la preparación.

Condensador: Es un sistema de lentes situado bajo la platina que permite concentrar la luz de la fuente de iluminación hacia la preparación.

Diafragma iris: Está en el interior del condensador y sirve para limitar el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado desviados (regula la luz y ajusta la apertura numérica).

Parte óptica

Oculares: Están colocados en la parte superior del tubo y su función es captar y ampliar la imagen obtenida por los objetivos. Actualmente se suelen usar los microscopios binoculares que tienen dos oculares unidos por un mecanismo que permite ajustar la separación inter-pupilar. Son normalmente de x10 y x12.

Objetivos: Están colocados en la parte inferior del tubo insertados en el revólver y obtienen la imagen real aumentada e invertida. Son lentes que captan la imagen a observar, están construidos de cristal o fluorita, poseen aumento propio, apertura numérica y está diseñada para trabajar con diferentes campos. Todos los objetivos tienen anillos de colores y números grabados sobre el tubo metálico, que nos permite saber a detalle cuáles son sus ventajas, la disposición de estos caracteres es la siguiente:

El anillo de color superior indica los aumentos

Aumentos Color anillo superior

1.0X Negro

2.5X Pardo

4.0X Rojo

6.3X Anaranjado

10X Amarillo

16X Verde claro

25X Verde oscuro

40X Azul Claro

63X Azul oscuro

100X Blanco

El lado superior izquierdo indica el número de aumentos que se puede lograr en un microscopio se obtiene multiplicando el número de aumentos que tiene el ocular por el número de aumentos que tiene el tubo y por el número de aumentos que tiene el objetivo con el que se está observando.

El lado superior derecho la apertura numérica. Es una medida de la amplitud del cono luminoso que se forma por las lentes del microscopio, ya sea del condensador o del objetivo.

El lado inferior la distancia mecánica que es la distancia que recorre a luz por el interior del microscopio desde que penetra por el objetivo, pasando por los tubos y espejos, hasta llegar al ocular, la distancia mecánica se mide desde la superficie de la rosca del objetivo hasta la base del ocular, esta distancia en el caso de nuestro microscopio es de 160 mm.

El lado inferior derecho el espesor del cubreobjetos. En ocasiones el objetivo puede traer en lugar de 0.17, el número 1, el cual indica que: Acepta cubreobjetos desde 0,17 a 0,22 mm de espesor, 10= No requiere cubreobjetos o 0,11 – 0,27 = Es ajustable a diferentes espesores de los cubreobjetos, desde 0,11 mm hasta 0,27 mm.

El anillo de color inferior indica en qué medio se hace la inmersión del objetivo.

Poder de resolución.El poder de resolución de una lente se define como la capacidad que tiene para discernir entre dos puntos muy cercanos entre sí y que puedan verse separada. El poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm, el microscopio óptico de 0,2 μ y el microscopio electrónico de 6 Angstrom.

Parte

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