¿PARA QUE SIRVE FLUSPEC EN EXPERIMENTOS DE EXPECTROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA?
Enviado por aalejiimenez • 28 de Marzo de 2017 • Informes • 1.721 Palabras (7 Páginas) • 436 Visitas
¿PARA QUE SIRVE FLUSPEC EN EXPERIMENTOS DE EXPECTROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA?
RESUMEN
El paquete de software educativo FluSpec es un tutorial totalmente contenida en la técnica de espectroscopia de fluorescencia, así como un simulador en el que se pueden realizar experimentos. El procedimiento para cada uno de los compuestos como el bisulfato de quinina y rodamina B también está contenido dentro del paquete junto con el ejemplo análisis de los resultados que se obtienen utilizando el software. (1)
[pic 1]
Las moléculas tienen diferentes estados llamados niveles de energía. La espectrometría de fluorescencia se refiere principalmente a estados vibracionales y electrónicos. En general, las especies objeto de examen tendrán un estado electrónico basal (un estado de baja energía) de interés, y un estado electrónico excitado de mayor energía. Dentro de cada uno de estos estados electrónicos hay diferentes estados vibracionales.
En la espectroscopia de fluorescencia, primero se excita la muestra mediante la absorción de un fotón de luz, desde su estado electrónico basal a uno de los distintos estados vibracionales del estado electrónico excitado. Las colisiones con otras moléculas causan que la molécula excitada pierda energía vibracional hasta que alcanza el estado vibracional más bajo del estado electrónico excitado. La molécula desciende luego a uno de los distintos niveles de vibración del estado electrónico basal, emitiendo un fotón en el proceso. Como las moléculas pueden caer a cualquiera de los diferentes niveles de vibración en el estado basal, los fotones emitidos tendrán diferentes energías y, por lo tanto, frecuencias. Así pues, mediante el análisis de las diferentes frecuencias de luz emitida por espectrometría de fluorescencia, junto con sus intensidades relativas, se puede determinar la estructura de los diferentes niveles de vibración.
En un experimento típico, se miden las diferentes frecuencias de luz fluorescente emitida por una muestra, manteniendo la luz de excitación a una longitud de onda constante. A esto se le llama espectro de emisión. Un espectro de excitación se mide mediante el registro de una serie de espectros de emisión utilizando luz de diferentes longitudes de onda. (2)
[pic 2]
Los factores que afectan la fluorescencia son:
- Estructura: la fluorescencia se presenta más comúnmente y en forma más intensa con compuestos que tienen grupos funcionales aromáticos con bajas energías de traición π-π*
- Temperatura y naturaleza del solvente: el efecto de aumento en la temperatura incrementa el número de choques moleculares, por lo que la desactivación tiende a efectuarse a través de procesos no radiactivos y por lo tanto se inhibe la fluorescencia.
- Efecto del pH: diferentes formas químicas que son posibles de existir a diferentes condiciones de pH, la intensidad de fluorescencia también es afectado por este factor.
- Efecto del oxígeno disuelto: debido al paramagnetismo de la molécula de oxígeno, esta tiende a desactivar cualquier estado activado por oxidación fotoquímica de la especie fotoluminiscente, provoca cruzamiento intersistemas y conversiones de las moléculas excitadas al estado triplete. (3)
Procedimiento para la espectroscopia de fluorescencia
[pic 3]
HIPÓTESIS
El paquete de software educativo FluSpec es de mucha ayuda en experimentos de espectroscopia de fluorescencia.
RESULTADOS
El procedimiento fue obtenido del programa FluSpec y se desarrolló los puntos 1, 3 y 4.
- Punto 1
Este punto se realizó pues fue una guía que nos familiarizo a explorar los diferentes controles de este software. Por lo tanto, se ejecutó el espectro de emisión de fluorescencia de una solución 2,4x10-7 M de rodamina B en disolvente de etanol con una longitud de onda máxima de excitación de 540 nm y un rango de emisión de 560 a 750 nm y el espectro de emisión de una solución 4,4x10-6 M de bisulfato de quinina en NaCl con una longitud de onda máxima de excitación de 348 nm y un rango de emisión de 370 a 660 nm.
RODAMINA B | ||||
Concentración en etanol | λ Excitación máxima | λ emisión inicial | λ emisión final | Área bajo la curva |
2,4x10-7 M | 540 nm | 560 nm | 750 nm | 11669 |
Espectro 1: Rodamina B a concentración 2,4x10-7 M etanol
[pic 4]
BISULFATO DE QUININA | |||||
Concentración | NaCl | λ Excitación máxima | λ emisión inicial | λ emisión final | Área bajo la curva |
4,4x10-6 M | 0 | 348 nm | 370 nm | 660 nm | 20931 |
Espectro2: Bisulfato de quinina a concentración 4,4 x10-6 M NaCl
[pic 5]
Punto 3
Se Trazó el espectro de emisión de fluorescencia de Rodamina B(RHB) y el de Bisulfato de quinina (QBS) en el mismo conjunto de ejes. el propósito de este experimento era observar que los espectros de emisión de fluorescencia correctos.
RODAMINA B | ||||
Concentración en etanol | λ Excitación máxima | λ emisión inicial | λ emisión final | Área bajo la curva |
2,4x10-7 M | 540 nm | 560 nm | 750 nm | 11669 |
BISULFATO DE QUININA | |||||
Concentración | NaCl | λ Excitación máxima | λ emisión inicial | λ emisión final | Área bajo la curva |
4,4x10-6 M | 0 | 348 nm | 370 nm | 660 nm | 20931 |
Espectro 3: espectros de emisión de fluorescencia correctos en el mismo espectro.
[pic 6][pic 7]
[pic 8][pic 9]
[pic 10]
- Punto 4
4.1. Se realizó el espectro en el mismo eje pero con diferentes concentraciones de etanol en la rodamina B
RODAMINA B | ||||
Concentración en etanol | λ Excitación máxima | λ emisión inicial | λ emisión final | Área bajo la curva |
2.4x10-7 M | 540 nm | 560 nm | 750 nm | 11669 |
1.8x10-7 M | 540 nm | 560 nm | 750 nm | 9186 |
1.2x10-7 M | 540 nm | 560 nm | 750 nm | 5789 |
0.6x10-7 M | 540 nm | 560 nm | 750 nm | 3224 |
0.1x10-7 M | 540 nm | 560 nm | 750 nm | 279 |
Espectro 4: espectros de emisión de fluorescencia a diferentes concentraciones de etanol en rodamina B.
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