PRACTICA DE ADN VEGETAL

Resumen

La mayoría de las técnicas de biología molecular que se aplican en plantas, involucran como pasos esenciales la extracción, la purificación y el análisis de ADN. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso hay células con diferentes formas y funciones. Está formado por desoxirribonucleotidos (A, G, C, T). Que a su vez están formados -D desoxirribosa y un ion fosfato.

Marco teórico

La selección del método de extracción es un paso fundamental en las técnicas moleculares y depende del organismo bajo estudio, el tejido disponible y su estado de conservación, la técnica que se aplicará posteriormente, así como la infraestructura de los laboratorios, los recursos económicos y tiempo para obtener resultados. Independientemente del método seleccionado es recomendable encontrar un equilibrio entre pureza y rendimiento de acuerdo a la aplicación posterior.

Se describen de manera general las etapas de los protocolos tradicionales y comerciales, se explican los métodos de análisis (concentración e integridad de la molécula) y almacenamiento del extracto.

Protocolos de extracción tradicional y comercial.

Colecta de la muestra. La colecta de la muestra y su manejo adecuados son indispensables para una extracción del ADN exitosa.

Una colecta y manejo apropiado de la muestra permite obtener ADN íntegro y sin contaminantes, los cuales afectan la acción de las enzimas durante la reacción de PCR. Cada tejido tiene sus consideraciones propias y siempre será necesario conocerlas o preguntar a los especialistas de cada grupo para llevar a cabo una colecta y extracción exitosas.

Homogeneización del tejido

La homogeneización, mecánica o química, consiste en romper las uniones entre las células para facilitar la interacción con las soluciones de lisis que ayudan a liberar el material genético

a) La homogeneización mecánica incluye el uso de:

Nitrógeno líquido.- Este procedimiento consiste en macerar la muestra con nitrógeno líquido, en un mortero de porcelana, hasta obtener un polvo muy fino. El nitrógeno líquido, congela de inmediato la muestra y evita que se formen cristales en el interior de la célula que rompen la estructura celular e inicie el proceso de degradación.

Este procedimiento, se puede utilizar en tejido fresco o congelado, por ejemplo semillas, plántulas, tejidos fibrosos o viscosos y hongos. Es importante considerar que si la muestra ya está congelada, se deberá disgregar con nitrógeno líquido para evitar la degradación del ADN por acción de las DNasas.

b) Homogeneización química.

En la homogeneización mediante agentes químicos, la muestra se mantiene en solución a altas temperaturas en presencia de detergentes, proteasas y agentes caotrópicos que rompen las uniones entre las células o que incluso pueden perforar la membrana celular. La disgregación química es recomendable para bacterias, muestras pequeñas

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