Practica sobre el ADN

Extracción de ADN

Introducción

Los polímeros son moléculas que tienen la capacidad de unirse y formar cadenas. La molécula de ADN es un polímero de cadenas de nucleótidos. Es decir es polinucleótido. Existen diversos procedimientos para extraer ADN de las células. Estos varían en la cantidad y pureza del ADN que se obtiene al finalizar el procedimiento, pero la base de todos ellos es muy similar. La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. La solución con detergente y sal es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmática y nuclear. El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Cuando el ADN va a utilizarse en el laboratorio para otras aplicaciones, se toman estas fibras que precipitan en la interfase y se disuelven en agua o en un amortiguador apropiado. Esta solución de ADN se puede mantener a 4°C (en un refrigerador) por años, puesto que es una molécula muy estable.

Objetivos

1. Comprender la base de las técnicas de extracción de ADN

2. Identificar al ADN como una biomolécula presente en los seres vivos.

Materiales

• 3 Fresas (un trozo de plátano, un kiwi, un trozo de papaya)

• 6 mL de detergente líquido

• 5 g de sal de mesa

• 44 mL de agua destilada

• Una pizca de ablandador de carne (Papaina)

• Bolsa Ziploc • Embudo

• filtros de café

• 2 Tubos de ensayo y Gradilla

• Vaso de precipitado de 250 y 500 mL

• Etanol al 95% BIEN FRÍO (ideal: del congelador)

• Palillos de plástico para revolver el ADN

Procedimiento

1. Introduzca 3 fresas (o ¼ de taza de fruta) en una bolsa Ziploc, intente sacar el aire antes de cerrar.

2. Aplaste las fresas por unos dos minutos hasta formar un puré. Tenga cuidado de no romper la bolsa.

3. Prepare una solución amortiguadora o buffer mezclando:

6 mL de detergente líquido de fregar + 5 g de sal de mesa + 44 mL de agua destilada + Una pizca de ablandador de carne.

4. Añada los 50 mL de la solución amortiguadora a la bolsa y cierre bien. Evite la formación de burbujas.

5. Con cuidado, coloque la bolsa en posición horizontal sobre papel toalla. Asegúrese que el macerado esté cubierto con la solución amortiguadora. Espere 5 minutos.

6. Filtre el macerado, luego descarte el filtro con el macerado.

7. Añada 2 ml del volumen filtrado a un tubo de ensayo.

8. Añada 2 ml de alcohol etílico 70%-90% frío al tubo de ensayo.

9. Sin mezclar, coloque el tubo de ensayo en una gradilla o en un vaso plástico. Espere por 5 minutos.

10. observe las hebras del DNA en la parte superior del tubo.

Cuestionario.

¿Por qué hay que filtrar?

¿Cuál es la función del detergente?

¿Cuál es la función de la sal?

¿Cuál es la función del ablandador de carne?

Extracción de ADN

Introducción

Los polímeros son moléculas que tienen la capacidad de unirse y formar cadenas. La molécula de ADN es un polímero de cadenas de nucleótidos. Es decir es polinucleótido. Existen diversos procedimientos para extraer ADN de las células. Estos varían en la cantidad y pureza del ADN que se obtiene al finalizar el procedimiento, pero la base de todos ellos es muy similar. La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. La solución con detergente y sal es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmática y nuclear. El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Cuando el ADN va a utilizarse en el laboratorio para otras aplicaciones, se toman estas fibras que precipitan en la interfase y se disuelven en agua o en un amortiguador apropiado. Esta solución de ADN se puede mantener a 4°C (en un refrigerador) por años, puesto que es una molécula muy estable.

Objetivos

1. Comprender la base de las técnicas de extracción de ADN

2. Identificar al ADN como una biomolécula presente en los seres vivos.

Materiales

• 3 Fresas (un trozo de plátano, un kiwi, un trozo de papaya)

• 6 mL de detergente líquido

• 5 g de sal de mesa

• 44 mL de agua destilada

• Una pizca de ablandador de carne (Papaina)

• Bolsa Ziploc • Embudo

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