PRÁCTICA N°05 EXTRACCION DE ADN

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERIA

ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE AGROINDUSTRIAL

ASIGNATURA:   BIOLOGÍA[pic 1]

TEMA              :  

CICLO             :    III

[pic 2]

ESTUDIANTES:        

DOCENTE     :   DR. QUISPE VILLANUEVA MANUEL SIXTO

NUEVO CHIMBOTE – PERÚ

2019

        PRÁCTICA N°05

                                                  EXTRACCION DE ADN

1. INTRODUCCIÓN

Según el modelo estructural propuesto por Watson y Crick en 1953, la molécula de ADN está constituida por dos largas cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Las dos cadenas de nucleótidos que constituyen una molécula de ADN, se mantienen unida, porque se forman enlaces entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas que quedan enfrentadas, de este modo podemos comparar una molécula de ADN  con una escalera de mano en la que las barras laterales están constituidas por series alternantes de moléculas  de desoxirribosa y acido  fosforito y peldaños por pares de bases nitrogenadas complementarias unidas entre sí por puentes de hidrogeno. La unión de las bases o apareamiento está condicionada químicamente de forma de la adenina (A) solo se puede unir con la Timina (T) y la Guanina (G) con la Citosina (C).

La información genética de ADN reside en la secuencia de las bases nitrogenadas. El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el de ADN es, por tanto, crítico para la célula, ya que este orden es el que constituye las instrucciones del programa genético de los organismos. Conocer esta secuencia de bases, es decir, secuenciar un ADN, equivale a descifrar su mensaje genético.

El ADN como molécula biológica presenta características físicas y químicas con las que les puede identificar. Una de ellas, y de fácil aplicación es la absorbancia. Esta característica mide la concentración del ADN en función  de la cantidad de luz de 260 nm de longitud de onda, que es absorbida por las moléculas en la solución. La molécula duplexa presenta menor absorbancia.

Como quiera que las proteínas absorben luz a 280 nm, se puede calcular la pureza de la solución con la proporción 260/280.

Cualquier aplicación de las técnicas moleculares, implica necesariamente la extracción de ADN, por lo que su ejecución en las practicas básicas de laboratorio, es de importancia en la formación de cualquier estudiante de ciencias.  

1. OBJETIVOS:

• Extraer el ADN a partir de una muestra biológica
• Comprobar la existencia  de ADN mediante espectofometría

1. MATERIALES Y MÉTODOS:

1. PROPORCIONADO POR EL LABORATORIO

• Espectrofotómetro de UV
• Mortero con pilón
• Vasos de precipitación
• Varillas de agitación
• Embudos de vidrio
• Pipetas
• Solución salina fisiológica
• Cloruro de sodio 2M
• Agua destilada

1. PROPORCIONADO POR EL ALUMNO

• 10 gramos de hígado de pollo fresco
• 2 gr. De detergente común
• Alcohol etílico de 96%
• Gasas

1. PROCEDIMIENTO:

Triture 10 g de hígado de pollo con la ayuda del motero y agregue 15 ml de solución salina fisiológica, de esta manera se logra el rompimiento mecánico de las membranas citoplasmáticas.

Filtre la mezcla triturada usando 3 capas de gasas.

Agregue a la solución de cloruro de sodio 2M en igual volumen del filtrado. El cloruro de sodio 2M al ser una solución hipertónica, permite la liberación del agua de las células, ayudando al rompimiento de las membranas celulares.

Añada 2 g de detergente común y agite fuertemente con una varilla de vidrio durante 10 minutos aproximadamente. El detergente contiene laurel sulfato de sodio, el que actúa separando los lípidos y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo.

Vierta la solución anterior en un vaso de precipitación, agregue alcohol de 96% por las paredes del vaso hasta que se formen dos capas o fases. Al agregar alcohol el ADN se precipita fuera de la solución celular formada por el hígado de pollo, la solución salina fisiológica, el cloruro de sodio y el detergente. En la interface se precipita el ADN.

Con una varilla de agitación agite suavemente siguiendo una sola solución dirección y observe como se adhiere una fibra blanquecina transparente a simple vista en la varilla, esta fibra blanquecina es la molécula de ADN.

Comprobación de la presencia de ADN mediante espectrofotometría

Tome una muestra de las moléculas de ADN obtenidas en los pasos anteriores, coloque etanol absoluto y lea en el espectrofotómetro de UV a 260 nm.

La misma solución léala a 280 nm. Establezca la proporción ADN/CHON. Se considera ADN de buena calidad si la proporción 260/280 está entre 1, 8 y 20.

Tenga en cuenta que: 1 DO260 = 50 ug ADNd ó 40 ug ADNs  

1. RESULTADOS:

1. DISCUSIONES

• Según Hershey y Chase (1952) al realizar ellos su experimento para confirmar si el ADN es la base del material genético en lo que se pudieron dar cuenta que el S-35 quedaba fuera de la célula, en cambio, el P-32 se encontraba dentro después de haber experimentado con fagos o cubiertas proteicas
• Según Watson y Crick(1909) su modelo de ADN era diferente al convencional, ya que el de ellos tenía forma de una doble hélice, lo que asocia la estructura molecular del ácido desoxirribonucleico(ADN), desde ese entonces, la estructura del ADN quedo definida

Según Karp, en biología celular y molecular, nos habla acerca de el componente esencial de el ADN, la adenina, la citocina, la guanina y la timina unidas por un armazón de azúcar, las cuales aísla los componentes y rompe estructuras para permitir la salida de estos

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