PRACTICA DE LABORATORIO Nº 1 CARACTERIZACIÓN FÍSICO-QUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS
Mercy Analí Argomedo BrionesApuntes5 de Noviembre de 2017
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PRACTICA DE LABORATORIO Nº 1 CARACTERIZACIÓN FÍSICO-QUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS
OBJETIVOS
Estudiar la prueba de Biuret en presencia de la albúmina.
Comprobar el efecto de los agentes desnaturalizantes en las proteínas.
INTRODUCCION
Las proteínas son biomoléculas orgánicas de origen animal, vegetal o microbiano que contienen carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno, en muchos casos azufre, y pueden tener además, fósforo, yodo y otros elementos. Son macromoléculas formadas en común por 20 α-L-aminoácidos diferentes unidos entre sí por enlaces peptídicos.
Cada aminoácido presenta una parte constante: el carbono alfa, el grupo amino (– NH2) y el grupo carboxilo (–COOH). También presentan una cadena lateral (grupo R) variable que les confiere características físico-químico diferenciales.
El reconocimiento y/o determinación cualitativa y cuantitativa de las proteínas puede efectuarse por distintos métodos, según las necesidades de precisión y sensibilidad. La reacción del Biuret se basa en que las proteínas reaccionan con CuSO4 en medio alcalino formando un complejo color violeta o rosado según la proteína. La reacción positiva con las proteínas se debe a que presentan dos o más enlaces peptídicos (–CONH–), formados por condensación de un grupo COOH de un aminoácido con el grupo amino NH2 de otro aminoácido.
Los aminoácidos azufrados cisteína y cistina, más no la metionina, se reconocen al calentar con álcali una solución proteica, desprendiéndose azufre en forma de sulfuro, el cual se detecta al reaccionar con el (CH3COO)2Pb y formar PbS de color negro. También se pueden dosar proteínas por el aumento de turbiedad debido a la presencia de ácidos fuertes (sulfosalicílico o tricloroacético).
En una solución proteica, cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en solución y provocará la precipitación. Si a una solución proteica se le adiciona un ácido, como el tricloroacético, el pH disminuye por debajo del pI de la proteína y los aniones tricloroacetato reaccionan con las proteínas; el producto es insoluble y precipita. Por el contrario, las proteínas en solución de pH superior a su pI reaccionan con cationes de metales pesados formando los proteinatos del catión correspondiente, el cual es insoluble y precipita.
La presente experiencia práctica tiene como finalidad la caracterización físico- química de las proteínas, empleando muestras de ovoalbúmina y caseína.
MATERIALES
- Material biológico: Ovoalbúmina diluída al 1/10 y al 1/3, caseína 0.5%, solución de proteasa.
Material y equipo de laboratorio:
- Gradilla para tubos. Tubos de ensayo de 16 x 150 mm (8).
- Pipetas de 1 mL (2), 2 mL (2), 5 mL (1) y 10 mL (1).
- Baño María a 37ºC y a temperatura de ebullición. Pizeta con agua destilada.
Reactivos y soluciones:
- Soluciones de NaOH 20%, CuSO4 5%, (CH3COO)2Pb 10%, ácido tricloroacético (ATCA) 10%, Ba(OH)2 5% y de ninhidrina 0.25%
- Agua destilada.
[pic 3]
PROCEDIMIENTO
- RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS:
COMPONETES Y PROCESO | TUBOS | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
Ovoalbúmina al 1/3 | 1 mL | 1 mL | --- | --- |
Caseína 0.5% | --- | --- | 1 mL | --- |
Solución de proteasa | --- | --- | 1 mL | 1 mL |
Agua destilada | 2 mL | 2 mL | 1.5 mL | 2.5 mL |
NaOH 20% | 1 mL | 1 mL | --- | --- |
CuSO4 5% | 0.5 mL | --- | --- | --- |
(CH3COO)2Pb 10% | --- | 0.5 mL | --- | --- |
Mezclar e incubar | T° ambiente | --- | 37 °C / 30´ | 37 °C / 30´ |
Ninhidrina 0.25% | --- | --- | 1 mL | 1 mL |
Temperatura de ebullición | --- | 3´ | 3´ | 3´ |
PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS:
COMPONETES Y PROCESO | TUBOS | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
Ovoalbúmina al 1/3 | 1 mL | 1 mL | 1 mL | 3 mL |
Agua destilada | 2 mL | 2 mL | 2 mL | 1 mL |
Ácido tricloroacético 10% | 1 mL | --- | --- | --- |
Ba(OH)2 5% | --- | 20 gotas | --- | --- |
HgCl2 1% | --- | --- | 1 mL | --- |
Temperatura de ebullición | --- | --- | --- | 3´ |
RESULTADOS
- RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS:
CARACTERÍSTICA | TUBOS | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
Color inicial | Incoloro | Incoloro | Amarillo claro | Amarillo claro |
Color final | Violeta | Negro | Violeta | Amarillo claro |
[pic 4]
Resultados del reconocimiento de proteínas.
- PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS:
CARACTERÍSTICA | TUBOS | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
Solubilidad: Si/No | No | No | No | No |
Precipitación: Si/No | Si | Si | Si | Si |
[pic 5]
Resultados de la precipitación de proteínas.
VI. DISCUSIÓN
RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS:
El resultado del tubo 1 el cual cambió de transparente a morado azulado indica y concuerda con la teoría que dice que las proteínas reaccionan con el CuSO4 en medio alcalino formando un color violeta, produciéndose asi la reacción de Biuret.
El resultado del tubo 2 concuerda con la teoría que dice que para detectar la presencia de una proteína se usa el (CH3COO)2Pb que al reaccionar con la asteína y astina forma un precipitado de PbS color negro, igual al resultado final del tubo 2.
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