Práctica No. 6 Extracción de ADN humano

Práctica No. 6

Extracción de ADN humano

Introducción  

La extracción de ADN es uno de los procedimientos más útiles en biología molecular.  La pureza y  cantidad  de  ADN  son  factores  fundamentales  a  la  hora  de  realizar metodologías  como  la  PCR,    la    clonación    de    fragmentos    de    ADN,    la    digestión    con enzimas de restricción o  la secuenciación. Esto, debido a la interferencia que pueden presentar compuestos como nucleasas, proteínas, iones u otros compuestos.  

En esta práctica se lleva a cabo la extracción de ADN a partir de células epiteliales de boca. Es importante  resaltar  que  los  protocolos  de  purificación  de  ADN  se  extienden  a  otros  tejidos, organismos o incluso medios. La diversidad de fuentes de obtención de ADN supone retos  distintos al procesamiento de las muestras, debido  a  las  condiciones  fisicoquímicas diferenciales que estas presentan.  

 El proceso de purificación de ADN humano llevado a cabo en esta práctica se realiza mediante el uso del kit Quick-gDNA™ MiniPrep (Zymo Research). Se    pretende    estudiar    la    calidad    del    ADN extraído mediante este procedimiento con el fin de familiarizar al estudiante con los procedimientos básicos de  biología molecular  como  son:  la  electroforesis,  la  extracción  y  purificación  de  ADN.  

Objetivos  

• Comprender los principios involucrados en el proceso de extracción de ADN.  
• Realizar la extracción y purificación de ADN a partir de células epiteliales de boca.  
• Analizar  la  importancia  de  este  procedimiento  en  el  desarrollo  de  la  biología  molecular.  
• Visualizar el ADN extraído en geles de agarosa.  

Materiales y Métodos

Obtención de células epiteliales y Lisis

1. Enjuagar la boca vigorosamente con 20ml de solución salina.  
2. Agregar la solución a un tubo Falcon.  
3. Centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos a 4°C y descartar el sobrenadante.
4. Agregar 500ul de Genomic Lysis Buffer, realizar vortex por 6 segundos y dejar a temperatura ambiente 10 minutos.

Purificación por columna  

1. Transferir la mezcla a columna con un tubo de colección.  
2. Centrifugar a 13000 rpm por 1 minuto y descartar el tubo de colección con el contenido.
3. Tomar un nuevo tubo de colección y agregar 200ul de Pre-Wash Buffer a la columna.
4. Centrifugar a 13000 rpm por 1 minuto y agregar 500ul de Wash Buffer a la columna.
5. Centrifugar a 13000 rpm por 1 minuto.
6. Transferir columna a eppendorf de 1.5ml.
7. Agregar 30ul de Elution Buffer a la columna.
8. Incubar a T° ambiente por 5min
9. Centrifugar a máx. Velocidad por 30 segundos.
10. Guardar tubo eppendorf con ADN eluido a -20°C.

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