LABORATORIO TRABAJO PRÁCTICO N° 4 Extracción simple del ADN

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LABORATORIO
TRABAJO PRÁCTICO N° 4

Extracción simple del ADN

NOMBRES: Meraris Romo, Isabela Maurelia, Constanza Belmar

CARRERA: Química Ambiental

FECHA ENTREGA: 21/04/2016

1. Resumen:

El objetivo del laboratorio n°3 se basó en la extracción sencilla de ADN de dos frutas en paralelo, principalmente de una banana y complementariamente una frutilla en nuestro caso.

Para esto se utilizaron métodos y materiales simples como: un mortero, sal de mesa, lavalozas, acompañados de una centrifuga que cumplió con separar los componentes del ADN luego de homogeneizar las muestras de frutas y alcohol el cual ayudo a disminuir la solubilidad del ADN lo que apreciamos al utilizar distintas concentraciones de este con muestras relativamente de igual contenido extraído de ADN. Obteniendo así que la concentración de 95% de alcohol logró hacer visible una mayor cantidad de ADN.

Concluyendo que a mayor concentración de alcohol la solubilidad del ADN disminuye, dispersandolo en otras fases.

Descripción breve considerando el objetico, los métodos, resultados y conclusión.

1. Introducción:

El ADN (ácido desoxi-ribonucleico) es una molécula bicatenaria, es decir, que está formada por 2 cadenas complementarias entre si y anti paralelas (pues el extremo 3’ se enfrenta al extremo 5’ de la homologa) formadas por secuencias de nucleótidos encadenados en un orden especifico que posee la información genética. Su estructura lineal aparece cuando la desoxirribosa se une a un grupo fosfato.

Cada nucleótido está formado por:

Una base nitrogenada ya sea, una purina o pirimidina,

Una desoxirribosa, es decir, un azúcar de 5 carbonos.

Un grupo fosfato el cual está formado por un átomo central de fósforo y a su alrededor cuatro átomos de oxígeno.

Es importante resaltar que tal como hay regiones con función conocida, casi la mitad del ADN del genoma humano consiste en regiones con funciones desconocidas y que tienen una secuencia de nucleótidos repetitiva en muchos casos pero con patrones hipervariables en muchas regiones del genoma.

Así el ADN forma largas cadenas de material genético originando además cromosomas (siendo un ADN por cromosoma). El como este se almacena depende del tipo de célula, ya sea eucariota o procariota.

En las eucariotas, el empaquetamiento es complejo y compacto, proceso para el que necesita de proteínas como las histonas, o las proteínas en caso de los espermatozoides, mientras que en las procariotas el ADN se pliega como una súper hélice generalmente circular asociada a unas pocas proteínas, no histonicas.

Para que la información pase de una molécula a otra, primero debe copiarse, (replicación). Pero como el ADN se encuentra en el núcleo y las proteínas en el citoplasma, se necesita de una molécula que funcione como intermediaria, es decir, el ácido ribonucleico mensajero (ARNm). El ADN se copia en ARNm en el núcleo (transcripción). Luego la información contenida en el ARNm es utilizada para construir proteínas (traducción), proceso realizado en el citoplasma.

Estos tres procesos, replicación transcripción y traducción constituyen el llamado dogma central de la Biología, que establece que la información fluye desde el ADN al ARN y de este a las proteínas. (Además, las proteínas controlan el proceso de replicación del ADN uniéndose a una secuencia específica en el ADN. De esta manera pueden activar o inhibir la transcripción de un gen determinado.)

Esto nos propone que existe una unidireccionalidad de la información de los genes de una célula, es decir, que el ADN es transcrito a ARN mensajero y que éste es traducido a proteína, elemento que finalmente realiza la acción celular. El dogma también postula que sólo el ADN puede duplicarse y, por tanto, reproducirse y transmitir la información genética a la descendencia. 

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                                                                 Imagen 1. Dogma central B.Molecular.

El objetivo de este laboratorio es la realización de una extracción simple de ADN, utilizando materiales de fácil acceso

1. Materiales (Por fruta):

-1 mortero

- 1 tubo falcon

-  5 tubos de ensayo

-1 embudo de filtración

- gasa

-  Reactivos:

        -  10 ml de Agua destilada

        -  1 cucharadita de sal de mesa

        -  1 cucharadita de Lava lozas Quick

        -   Alcohol de 60,70, 80, 90 y 95% 

        -   Bromuro de Etidio

Disponible para todos los grupos:

• 2 centrifugas
• Parafilm
• Masking Tape

Métodos:

1.Se molieron cuidadosamente 23.30 gr de plátano y 29.61 gr de frutilla en morteros aparte, hasta conseguir una especie de papilla de cada fruta.

2.Se mezclaron a la vez dos porciones de 10 ml de agua con una cucharadita de sal y una cucharadita de lava lozas Quick evitando la formación de espuma.

3.Se aplicaron lentamente una mezcla liquida en cada “papilla” hasta conseguir dos mezclas lo más homogéneas posible.

4.Ambas mezclas fueron igualadas en peso -agregando agua destilada- acabando con una masa de 50.98 gr.

5.Ambas mezclas fueron centrifugadas separando claramente a la vista, una especie de concentrado de la papilla de fruta del agua.

6. Las mezclas fueron ambas pasadas por una gasa a través de un embudo para separar toda la parte liquida.

7. El líquido obtenido se separó en 5 tubos de ensayos, todos con cantidades similares (alrededor de 3 ml).

8. A cada tubo de ensayo se le agrego una concentración de alcohol diferente en proporción 1:1

9. Se enfriaron las muestras para obtener una imagen más clara del ADN.

1. Resultados:

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En la primera imagen se observa la fruta, que tras el ser molida y agregarle el agua destilada con sal y el lava lozas. Se obtuvieron básicamente mezclas más espesas (en ambas frutas) de lo esperado (tras dejarlas reposar por 10 minutos).

Se logró moler completamente la fruta con mucho cuidado.

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Luego, tras igualar las masas (50.58 gr) con agua destilada, estas fueron centrifugadas dejando una división clara a la vista, siendo una parte una zona de esencialmente fruta y el resto, una zona básicamente liquida.

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